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000100000000000000001分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照,可排除试剂盒本身的影响。进一步判定,主要有以下可能的情况和建议: 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够,抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确:同源臂15~25nt(不计算酶切位点),CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够,抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化,001. 上样:样品加载: 上样量:细胞:10ug,组织:20ug,标记物上样量:2ul。 2. 电泳:分离胶浓度:常见有10%、9%和6%(大分子量选用浓度较低的胶,小分子量则相反)。浓缩胶浓度:5%。 电泳缓冲液配制:将100ml母液加入900ml蒸馏水,再加入1g SDS。 电泳条件:运行浓缩胶条件为80v,40min;运行分离胶条件为120v,50min。 3. 转膜:电转液:100ml母液+700ml蒸馏水+200ml甲醇(1)将PVDF膜在100%甲醇中浸泡10秒至15秒。 (2)倒入配置好的转印缓冲液于平底托盘中,将10000000000一、基本概念与技术原理 大动物脑立体定位仪又称脑固定装置,它是利用颅骨外面的标志或其它参考点所规定的三度坐标系统,来确定皮层下某些神经结构的位置,以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、引导电位等研究。该设备是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究设备,用于对神经结构进行定向的注射、刺激、破坏、引导电位等操作,可用于帕金森氏病动物模型建立,学习记忆,脑内神经干细胞移植,脑缺血000010慢性鼻窦炎(chronicrhinosinusitis,CRS)是鼻窦黏膜炎症性疾病,病程超过12周,是耳鼻咽喉科常见疾病之一。国际上广泛采用的大体分型模式将CRS分为不伴有鼻息肉CRS(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)和伴有鼻息肉CRS(chomic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)。 CRS动物模型主要是用鼠、兔、羊等进行建模,方法主要包括滴鼻、雾化、手术干预等,由于所使用的干预措施不同,建模时间也长短不一(7~112d)。 01一、羊的CRS模型的构建 由于大体解剖0