《J Clin Invest》解读：分子互作泛素化修饰！TRIB3通过促进Smurf1中自泛素化和分解介导血管钙化进展 慢性肾脏病(CKD)相关血管钙化是终末期肾病患者的常见并发症，其发病率随肾功能恶化显著升高。研究证实，血管钙化患者的心肌梗死、心力衰竭及外周动脉疾病风险较普通人群升高3-5倍，心血管死亡率提升2-3倍，是CKD患者死亡的首要原因。寻找CKD血管钙化的分子机制有助于开发对应的靶向治疗策略。 2025年4月，山东大学齐鲁医院心内科与重症医学科团队

死的细胞不具备活性，所以不可能会出现像别的细胞一样分裂和复制之类的繁殖，只能源于头皮、源于肉体、源于身体，就连出油也只能来源于头皮。毛发除了分叉和打结与干枯、脱发、断发、蜡黄以外，还有哪些问题是我所不知道的吗？越多越好，越全面越好，越完全越好，越完整越好，越具体越好，越详细越好，把所有的全部的都告诉我吧，把所有的全部的都给我吧。有图片和文字与视频的话，那就更好了。拜托了。

SCARB2如何激活MYC转录？ 《Nat Commun》解读：SCARB2如何激活MYC转录？ 📌 Step 1：SCARB2调控MYC乙酰化修饰的关键位点！ → 实验发现：过表达SCARB2能显著提升MYC蛋白的乙酰化水平（图1d）！ → 质谱锁定靶点：MYC的K148和K326位点乙酰化被SCARB2富集！ → 突变体验证：K148R突变后，SCARB2无法提升乙酰化（图1e）→ K148是核心开关！ 💡 划重点：SCARB2专宠MYC-K148位点，为后续辅因子“铺路”！ 📌 Step 2：SCARB2的助攻搭档竟是HDAC3？ → 筛查乙酰化酶/去乙酰化酶：p300、H

TRIM56通过泛素化促进YBX1蛋白降解的分子机制 一、TRIM56调控YBX1稳定性 蛋白酶体抑制剂MG132处理可逆转TRIM56过表达引起的YBX1蛋白减少，且不影响YBX1 mRNA水平，提示TRIM56通过蛋白酶体途径降解YBX1（图1a-b） 。蛋白质合成抑制剂CHX追踪实验显示：TRIM56过表达使YBX1半衰期显著缩短，而TRIM56沉默则延长YBX1半衰期（图1c-f） 。 二、TRIM56介导泛素化修饰 Co-IP实验证实TRIM56过表达显著增强YBX1多聚泛素化修饰，同时降低YBX1蛋白水平（图1g-h） 。Co-IP实验 发现TRIM56野生

一、筛选与circCFL1的互作蛋白分子HDAC1 为了阐明circCFL1对TNBC影响的潜在分子机制，进行RNA pull down实验，对显著富集的55 kD蛋白进行质谱分析（图1a），发现HDAC1是circCFL1的高潜蛋白（图1b）。分子对接显示circCFL1与HDAC1蛋白存在物理结合（图1c）。 二、确定circCFL1与HDAC1存在互作 FISH和IF检测发现circCFL1和HDAC1在细胞核中共定位（图1d）。RNA pull down-WB实验证实circCFL1和HDAC1相互作用（图1e）。 三、确定circCFL1与HDAC1结合的特定区域 首先，基于RNAfold预测的circCFL1茎

YBX1（Y-box结合蛋白1）是一种多功能核酸结合蛋白，参与转录、翻译调控及应激响应。然而，其在神经元中的表达调控机制尚不明确。本文聚焦于泛素-蛋白酶体降解途径对YBX1的调控，并揭示了E3泛素连接酶TRIM56与YBX1的直接相互作用及结合特性。 1. 确定YBX1降解的主要途径利用两种蛋白质降解途径抑制剂处理原代神经元：MG132（泛素-蛋白酶体途径抑制剂）；3MA（自噬抑制剂，靶向III类PI3K）；CQ（氯喹，溶酶体功能抑制剂）。 结果：MG132处理显著升高YBX1蛋

UBE2C通过阻断SNAT2与NEDD4L相互作用，促进SNAT2 K59残基上的单泛素化，从而阻止K63连接的K33多泛 素化。 图1 第一步，确定SNAT2单泛素化和多泛素化位点 MS泛素化分析表明，UBE2C过表达升高SNAT2 59位点赖氨酸泛素化，而降低其33位点赖氨酸泛素化（图2a）。构建SNAT2 K59R和SNAT2 K33R突变体进行Co-IP分析，发现SNAT2 K59R显著抑制了UBE2C介导的SNAT2单泛素化（图2b），表明SNAT2在K59残基上被单泛素化；SNAT2 K33R突变阻断了K63连锁的多泛素化（图2c），表明SNAT2在K33残基上被多

铁死亡是一种由大量脂质过氧化物积累所驱动的调节性细胞死亡方式，与肿瘤发病密切相关，其调控机制尚不清楚。因此，深入理解肿瘤细胞抵抗铁死亡的分子机制，将为肿瘤治疗提供新策略。 2024年4月，武汉大学医学研究院、教育部免疫与代谢前沿科学中心、中南医院以及泰康生命医学中心团队在PNAS杂志上，发表“USP8-governed GPX4 homeostasis orchestrates ferroptosis and cancer immunotherapy”的研究成果。该研究揭示了USP8通过稳定谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）来抵

一、筛选与circCFL1的互作蛋白分子HDAC1 为了阐明circCFL1对TNBC影响的潜在分子机制，进行RNA pull down实验，对显著富集的55 kD蛋白进行质谱分析（图1a），发现HDAC1是circCFL1的高潜蛋白（图1b）。分子对接显示circCFL1与HDAC1蛋白存在物理结合（图1c）。 二、确定circCFL1与HDAC1存在互作 FISH和IF检测发现circCFL1和HDAC1在细胞核中共定位（图1d）。RNA pull down-WB实验证实circCFL1和HDAC1相互作用（图1e）。 三、确定circCFL1与HDAC1结合的特定区域 首先，基于RNAfold预测的circCFL1茎

冬凌草乙素以KEAP1为靶点 一、筛选冬凌草乙素的结合蛋白 冬凌草乙素对HepG2细胞有何作用？合成生物素标记的冬凌草乙素，进行pulldown实验（图1a），银染色分析显示在70 KDa附近存在差异带（图1b-c），随后进行质谱分析鉴定，其中包括KEAP1蛋白（69 KDa）（图1d）。提示冬凌草乙素可能以KEAP1为靶点。 二、PGAM5与KEAP1相互作用 KEAP1蛋白作为重要的调节蛋白，可以通过与其他蛋白相互作用来调节细胞内信号通路。基于此，推测KEAP1可能通过与其他蛋白的相互作

鉴定关键代谢物油酸或别胆酸改变的信号通路 为了探索油酸潜在的机制，对有或无油酸处理的细胞进行转录组测序，通路分析（KEGG和GSEA）发现PI3K/Akt是油酸诱导的最高富集通路（图2a），一致地，油酸处理细胞后增加磷酸化的JAK1、PI3K和AKT的蛋白表达，并且这种上调被ENO1-siRNA或ENO1拮抗剂AP-III-a4逆转（图2b）。在动物模型中，油酸增加PI3K/Akt通路标志蛋白的表达（图2c）。表明油酸与结直肠癌细胞中的ENO1结合，激活致癌PI3K/Akt信号通路。 同样地，对有或

结直肠癌(CRC)是全球癌症死亡的主要原因，研究表明微生物代谢物与结直肠癌密切相关，血液中的微生物代谢在结直肠癌和结直肠腺瘤(CRA)患者中都有显著的变化。然而，目前尚不清楚在腺瘤至腺癌癌变过程中，粪便和血液代谢组是如何改变的，以及血液循环中的代谢物是否会影响CRC的进展。 2024年8月，昆明医科大学第一附属医院团队联合香港中文大学团队、南京医科大学团队等共同在Cancer Cell（IF=48.8）上发表了题为“Integrative plasma and fecal metabolomics id

第一步，确定TRIM56促使FASN泛素化位点 为了进一步研究trim56介导的FASN降解的分子机制，过表达FLAG-TRIM56，并用氯喹（一种溶酶体依赖蛋白降解的药物抑制剂）或MG132（一种蛋白酶体依赖蛋白降解的抑制剂）治疗肝细胞，Western blot分析显示，TRIM56过表达诱导的FASN下调是由MG132挽救的，表明蛋白酶体依赖性的FASN降解可能起主要作用（图1a）。IP-WB实验显示TRIM56过表达导致FASN泛素化增强（图1b-c）。泛素中存在多个位点会导致底物泛素化，研究了泛素化的具体

图1 一、找SCARB2的互作蛋白 通过IP-MS分析发现MYC、HDAC3是潜在的相互作用蛋白（图2a）。Co-IP实验证实MYC与SCARB2和HDAC3互作（图2b-d）。Co-IP实验发现MYC和SCARB2互作位于细胞质和细胞核（图2e）。此外，Co-IP还发现SCARB2的缺失增加了HDAC3与MYC的互作，而SCARB2的过表达减少了HDAC3与MYC的互作（图2f-g）。 二、确定互作的结构域 针对MYC的结构域构建不同突变体进行Co-IP实验，MYC的CT元件和 NTD结构域负责MYC与SCARB2和HDAC3的相互作用（图2h），表明SCARB2与HDAC3共享MYC的相

非酒精性脂肪性肝病（Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD）是全球最常见的慢性肝脏疾病。迄今为止，美国或欧洲药品管理局尚未批准任何抗NAFLD药物。因此，亟待深入了解该疾病的发病机制并研发针对NAFLD的靶向治疗药物。 2024年3月，中国科学技术大学翁建平教授团队在Journal of Clinical Investigation（IF=13.3）上发表了题为“TRIM56 protects against nonalcoholic fatty liver disease by promoting the degradation of fatty acid synthase”的研究成果。揭示了靶向TRIM56-FASN 轴在治疗NAFLD中的

为了深入了解TRIM56调节NAFLD的可能机制，对TRIM56-HepKO肝组织中的TRIM56相互作用组学（BioGrid）和转录组学数据进行综合分析，FASN成为重点候选互作基因（图1a-c）。对TRIM56-KO小鼠肝细胞中TRIM56互作组学和转录组学综合分析得出类似的结果（图1d-e）。Western blot结果显示FASN在原代小鼠肝细胞和过表达TRIM56的人肝细胞系中表达降低（图1f-g）。此外，Trim56-HepKO小鼠的肝组织以及Trim56-KO小鼠的原代肝细胞中FASN以及脂肪酸代谢致病过程中下游脂肪生成级联蛋白的

DCAF7招募USP10去泛素化并稳定G3BP1 STEP 1｜确定DCAF7可与USP10互作 IP-MS线索：USP10被锁定为DCAF7的潜在互作蛋白（去泛素化酶属性+已知与G3BP1互作）。 Co-IP验证：外源性/内源性实验均证实DCAF7与USP10直接结合（图2a-b）。 意义：DCAF7可能招募USP10执行去泛素化功能！ STEP 2｜USP10是G3BP1的“蛋白守护者” 敲低USP10降低G3BP1的蛋白水平，但不影响其mRNA水平； 过表达USP10导致G3BP1蛋白水平升高，但不影响其mRNA水平（图2c-f）。 G3BP1蛋白在usp10敲低细胞中的半衰期明显缩

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🔍关键发现一： circCFL1与HDAC1的互作验证 ✅ 初筛锁定目标： RNA pull down联合质谱分析在55kD处捕获HDAC1（数据👉图1a-b） 分子对接模拟显示circCFL1与HDAC1存在物理结合位点（结构预测👉图1c） ✅ 互作空间定位： FISH/IF双标证实circCFL1与HDAC1在细胞核共定位（可视化证据👉图1d） RNA pull down-WB直接验证二者结合（实验验证👉图1e） ⚙️关键发现二：互作结构域精准定位 🔬截断体实验：基于茎环结构构建circCFL1截短体，发现所有亚型均保留HDAC1结合能力（👉

科研干货｜USP1如何稳定CDK5？ ✨Step1：锁定目标蛋白！ 👉实验方法：IP-MS筛选+UbiBrowser预测 🌟亮点发现：从6个候选蛋白中锁定CDK5！敲低USP1后CDK5蛋白减少但mRNA不变，说明USP1在翻译后调控CDK5（图2b-c） 💡#科研小技巧 蛋白水平变化但基因不变？快查翻译后修饰！ 🤝Step2：USP1与CDK5 相互作用！ 🔍RosettaDock预测互作结构（图2d） ✅实验验证：内外源Co-IP+ GST pulldown三连击（图2e-g） ❗️结论：USP1和CDK5是真互作！ #实验锦囊 互作验证黄金三件套：预测+Co-IP+

如何鉴定泛素修饰类型与靶蛋白修饰位点？ 一、泛素修饰类型鉴定。 使用HA-Ub-WT/KO泛素修饰系统检测修饰类型：使用HA-Ub-WT和HA-Ub-KO（K6，K11，K27，K29，K33，K48和K63）载体，分别与泛素连接酶（E3）和修饰底物共转染细胞，通过CoIP-WB检测底物泛素化水平，明确泛素连接酶对修饰底物的泛素修饰类型。或再次使用HA-Ub-WT（K6R，K11R，K27R，K29R，K33R，K48R和K63R）载体，分别与泛素连接酶（E3）和修饰底物共转染细胞，通过CoIP-WB检测底物泛素化水平，再次明确泛

🔍 ChIP-seq是什么？ ChIP-seq全称：染色质免疫沉淀测序（Chromatin Immunoprecipitation Sequencing） 本质：锁定特定蛋白（如转录因子、组蛋白修饰酶）在基因组上的结合位点！ 🔬 实验三步走 Step1：交联抓包 💥 → 甲醛处理细胞，把DNA和蛋白“粘”在一起 Step2：抗体钓鱼 🎣 → 用特异性抗体抓住目标蛋白，连带结合的DNA片段一起沉淀（一锅端！） Step3：测序破案 🧬 → 纯化DNA，高通量测序+生物信息学分析，锁定结合位点（精确到碱基！） 🌟 三大应用场景 1

💡《JCI》解读：UBE2C如何调控SNAT2泛素化 📌【研究主线四步破译】 1️⃣ 靶点锁定：IP-MS筛出关键底物SNAT2👉用IP-MS+泛素组学双剑合璧，发现UBE2C作用下SNAT2泛素化水平飙升（图1a） 🔥核心线索：SNAT2是氨基酸转运蛋白，与肿L代谢&转移密切相关！ 2️⃣ 实锤互作：Co-IP+PLA双重验证Co-IP和PLA实验证实UBE2C与SNAT2相互作用（图1 b-c）。 🚨意义：物理结合是功能调控的前提！ 3️⃣ 泛素化"跷跷板"效应🔍Co-IP发现：UBE2C促进SNAT2单泛素化（图1d）同时

《PNAS》分子互作机制 第一步，确定与下游蛋白分子的互作关系 内源Co-IP实验和GST pulldown实验发现USP8与GPX4互作（图2a-c）。 第二步，探索USP8与GPX4蛋白结合的具体位置 针对USP8构建不同的突变体分别进行Co-IP实验，发现USP8通过 aa1-313、aa715-1118区域与GPX4结合（图2d-e）。 第三步，USP8如何影响GPX4蛋白的稳定性 USP8是一个去泛素化酶。Co-IP分析发现，USP8能降低GPX4的泛素化水平，而酶非活性突变体USP8-c786a则不能去除GPX4的泛素链，表明USP8通过其去泛素化酶活性

🔬【科研干货】USP8如何影响GPX4蛋白的稳定性？一篇搞懂蛋白稳态机制！ 铁死亡（ferroptosis）在肿瘤治L领域超火🔥 但GPX4蛋白的调控机制还不明确！ 发现去泛素化酶USP8可能是关键钥匙🗝️ ✨核心发现 1️⃣【敲低USP8会降低GPX4蛋白量】 👉WB显示蛋白显著减少（图1a-b） 👉但RNA水平稳如泰山（图1c）➡️说明是翻译后调控！ 👉抑制剂处理也重现现象（图1d）✔️ 2️⃣【GPX4酶活性是关键】 💉构建WT和突变体U46S： 👉过表达野生型GPX4能抵抗RSL3诱导的

《PNAS》解读：USP8如何稳定GPX4？ 铁死亡调控：USP8如何稳定GPX4？🔬 🌟 研究亮点：铁死亡是一种新型细胞死亡方式，而GPX4是其关键调控蛋白。揭示了USP8在调控GPX4蛋白稳定性中的重要作用！ 🔍 关键发现： 1️⃣ 敲低USP8降低GPX4蛋白水平 通过WB实验发现，敲低USP8显著降低了GPX4蛋白表达（图1a-b），但不影响其RNA水平（图1c）。使用抑制剂也得到了类似结果（图1d）。👉 提示：USP8可能在翻译后水平调控GPX4！ 2️⃣ GPX4的功能验证 构建GPX4 WT及其酶促失活

TRIM25如何通过泛素化调控ITPKB的稳定性 TRIM25（泛素连接酶）通过给ITPKB蛋白“贴标签”（K48泛素化），让它被蛋白酶体“吃掉”，从而调控细胞存活和氧化应激！ 📌 机制解析 1️⃣ TRIM25是“清洁工”还是“杀手”？ 敲低TRIM25 → ITPKB蛋白堆积（图2a-b）→ 细胞存活率↑、ROS↓（图2l-m） 过表达TRIM25 → ITPKB被“清理”→ 细胞更易死亡 💡 结论：TRIM25是ITPKB的“杀手”，控制其稳定性！ 2️⃣ 蛋白酶体：细胞里的“垃圾处理厂” 加入MG132（蛋白酶体抑制剂

如何鉴定泛素修饰类型和靶蛋白的修饰位点？ 1. 使用HA-Ub-WT/KO泛素修饰系统检测修饰类型 步骤： HA-Ub-WT和HA-Ub-KO系统：使用HA标记的野生型泛素（HA-Ub-WT）和赖氨酸突变型泛素（HA-Ub-KO，如K6R、K11R、K27R等）载体，与泛素连接酶（E3）和修饰底物共转染细胞。 CoIP-WB检测：通过免疫共沉淀（CoIP）和蛋白质印迹（WB）检测底物的泛素化水平，明确E3连接酶对底物的泛素修饰类型。 小贴士： HA-Ub-KO系统可以帮助排除特定赖氨酸位点的泛素化作用。 通过对比不

CARM1与HIF1A存在关联并直接相互作用 第一步：筛选CARM1的互作蛋白 用anti-Flag-CARM1 IP-MS技术鉴定CARM1的互作蛋白，结果发现CARM1和HIF1A有“关联”！🔗 （图1a：CARM1和HIF1A的互作初步证据） 第二步：验证CARM1与HIF1A的相互作用 在常氧和缺氧条件下做了Co-IP实验，结果CARM1和HIF1A真的互作！🤝 GST pulldown实验也进一步证实了这一点！ （图1b-g：Co-IP和GST pulldown实验结果） 第三步：确定互作的具体位置 为了搞清楚CARM1和HIF1A的互作细节，构建了CARM1的截短载体： EVH1

分子互作蛋白如何筛选？ 🔬国刊之光《STTT》：分子互作蛋白筛选，从机制到验证全流程。 🌟 STEP1：锁定调控层级——先排除转录干扰！ ✔️ 现象：复发性组织+TMZ耐药细胞中，ITPKB蛋白（非mRNA）显著升高（图1a-b）→暗示是转录后调控（比如降解减少/稳定性增加）。 💡 划重点：若mRNA与蛋白表达趋势不一致，优先考虑翻译后修饰（泛素化、磷酸化等）或蛋白互作调控！ 🌟 STEP2：互作泛素酶筛选——CoIP-MS挖出关键“剪刀手” 🔎 技术流：用CoIP-MS钓

由于细胞之间的异质性，不同的细胞对某些药物有不同的反应。尽管使用传统小型化微量滴定板进行药物筛选已经很好地建立起来并且易于执行，但单细胞药物筛选仍然面临一些技术障碍，包括在开放环境中分散液体的不受控制的蒸发。传统的小型化微滴定板只能静态培养细胞，这限制了它们的适用性，因为这种方法无法模拟自然的细胞外微环境。相比之下，微流体装置可以通过连续输注进行3D细胞培养，使其能够模拟体内与细胞生理学相关的微环境

分子互作蛋白如何筛选？ 🔬国刊之光《STTT》：分子互作蛋白筛选，从机制到验证全流程。 🌟 STEP1：锁定调控层级——先排除转录干扰！ ✔️ 现象：复发性组织+TMZ耐药细胞中，ITPKB蛋白（非mRNA）显著升高（图1a-b）→暗示是转录后调控（比如降解减少/稳定性增加）。 💡 划重点：若mRNA与蛋白表达趋势不一致，优先考虑翻译后修饰（泛素化、磷酸化等）或蛋白互作调控！ 🌟 STEP2：互作泛素酶筛选——CoIP-MS挖出关键“剪刀手” 🔎 技术流：用CoIP-MS钓

DCAF7通过抑制G3BP1的K48链多泛素化来稳定G3BP1蛋白 1. 筛选DCAF7的互作蛋白G3BP1 步骤： IP-MS分析：为了探索DCAF7在鼻咽癌（NPC）进展中的作用，进行免疫沉淀-质谱（IP-MS）分析，筛选出DCAF7的潜在互作蛋白（图1a）。 生物信息学分析：通过STRING数据库和Cytoscape MCODE分析，发现G3BP1位于排名最高的蛋白簇中心（图1b）。G3BP1是一种应激颗粒（SG）组装因子，在癌症进展中起重要作用。 Co-IP验证：外源性和内源性Co-IP实验证实了DCAF7与G3BP1的相互作用（图1c）。 小贴

第一步：DCAF7和USP10的“牵手”🤝 之前的研究发现，DCAF7可以抑制G3BP1的泛素化，从而让它更稳定。那么问题来了：DCAF7是不是通过招募一个“去泛素化小能手”来帮G3BP1“续命”呢？ 果然！通过IP-MS实验，我们发现USP10（一种去泛素化酶）是DCAF7的潜在合作伙伴。外源性和内源性Co-IP实验都证实了这一点（图2a-b）！DCAF7和USP10真的可以相互作用！ 第二步：USP10是G3BP1的“稳定剂”⚖️ 接下来，我们研究了USP10对G3BP1的影响。 敲低USP10后，G3BP1的蛋白水平明

微流控细胞分选芯片介绍 微流控细胞分选芯片是一种利用微流控技术和微纳米加工技术制备的芯片，用于将混合的细胞或微生物精确地分离和分类。该技术可以通过微型通道中的流体控制来实现对细胞的操纵和分离，具有高效、高通量、低成本、低样品消耗等优点。 工作原理 微流控芯片利用流体动力学原理，通过控制微小体积内的液体流动来模拟生物体内的生理环境。通过精确控制样品的流速、方向和停留时间，实现对细胞的选择性培养、分离或反

DCAF7通过抑制G3BP1的K48链多泛素化来稳定G3BP1蛋白 1. 筛选DCAF7的互作蛋白G3BP1 步骤： IP-MS分析：为了探索DCAF7在鼻咽癌（NPC）进展中的作用，进行免疫沉淀-质谱（IP-MS）分析，筛选出DCAF7的潜在互作蛋白（图1a）。 生物信息学分析：通过STRING数据库和Cytoscape MCODE分析，发现G3BP1位于排名最高的蛋白簇中心（图1b）。G3BP1是一种应激颗粒（SG）组装因子，在癌症进展中起重要作用。 Co-IP验证：外源性和内源性Co-IP实验证实了DCAF7与G3BP1的相互作用（图1c）。 小贴

国外生物样本试剂进口到国内清关运输温度可控 h663664

泛素修饰类型和靶蛋白修饰位点如何鉴定泛素修饰类型和靶蛋白的修饰位点？ 1. 使用HA-Ub-WT/KO泛素修饰系统检测修饰类型 步骤： HA-Ub-WT和HA-Ub-KO系统：使用HA标记的野生型泛素（HA-Ub-WT）和赖氨酸突变型泛素（HA-Ub-KO，如K6R、K11R、K27R等）载体，与泛素连接酶（E3）和修饰底物共转染细胞。 CoIP-WB检测：通过免疫共沉淀（CoIP）和蛋白质印迹（WB）检测底物的泛素化水平，明确E3连接酶对底物的泛素修饰类型。 小贴士： HA-Ub-KO系统可以帮助排除特定赖氨酸位

XFD660 马来酰亚胺是硫醇反应性染料，用于标记巯基，。XFD660 适合成像和流式细胞术应用。在pH 4-10范围内荧光不受影响且光稳定性好。XFD660 的马来酰亚胺衍生物通常用于与蛋白质、寡核苷酸或低分子量配体上的硫醇基团结合，产生的结合物与其他光谱相似的荧光团相比，荧光亮度明显更高，光稳定性更强。 马来酰亚胺在中性条件下很容易与蛋白质、经巯基修饰的寡核苷酸和其他含巯基分子中的巯基发生反应。所得的染料偶联物相当稳定。 AF660马来酰

《Adv Sci》解读：研究KEAP1与PGAM5结合的区域 💡第一步，确定KEAP1与PGAM5结合的结构域及潜在氨基酸 KEAP1可以与PGAM5结合，它们结合的结构基础尚不清楚（图1a）。PGAM5是磷酸甘油突变酶超家族的成员，包含一个PGAM结构域、TM结构域、MM结构域和一个与KEAP1相互作用的NxESGE基序（图1b）。而KEAP1则有NTR域、BTB域、IVR域、Kelch域和CTR域，Kelch域负责与PGAM5结合（图1c）。分子动力学模拟和轨迹聚类研究，以及结合AlphaFold3算法的预测结果，提示PGAM5上的Val78、Glu79、Se

冬凌草乙素可能直接与KEAP1结合，影响PGAM5，从而在HCC中发挥药理作用 冬凌草乙素以KEAP1为靶点 第一步，筛选冬凌草乙素的结合蛋白 为了证实冬凌草乙素对HepG2细胞的作用，合成生物素标记的冬凌草乙素，进行pulldown实验（图1a），银染色分析显示在70 KDa附近存在差异带（图1b-c），随后进行质谱分析鉴定，其中包括KEAP1蛋白（69 KDa）（图1d）。提示冬凌草乙素可能以KEAP1为靶点。 第二步，PGAM5与KEAP1相互作用 KEAP1蛋白是一种重要的调节蛋白，可以通过与其

一、百萤AF700 NHS 酯 *与 Alexa Fluor 700 NHS 酯的结构相同*参数 Ex(nm) 696 Em(nm) 719 分子量 ~1400 溶 剂 DMSO 存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮 反应基团 NHS酯 二、百萤AF700 NHS 酯 *与 Alexa Fluor 700 NHS 酯的结构相同*优势 1.易于结合：高效地将伯胺标记在蛋白质、抗体和胺修饰的寡核苷酸上 2.荧光明亮且稳定：在pH 4-10范围内荧光不受影响且光稳定性好 3.亲水性好：减少聚集，提高信号清晰度，适用于高级成像和活细胞研究 三、百萤AF700 NHS 酯 *与 Alexa Fluor 700 NHS 酯

肝细胞癌（HCC）是一种与慢性肝病和肝硬化密切相关的原发性肝脏恶性肿瘤。目前，免疫治疗和化疗是HCC患者最好的治疗选择，但大多数HCC患者在手术切除或消融后复发。因此，迫切需要更有效的治疗选择，而分子靶向治疗是一种很有前景的方法，可以提供更好的结果，降低全身毒性，减少副作用。 2024年8月，广州中医药大学研究团队在Advanced Science（IF=14.3）上发表了题为“Ponicidin Promotes Hepatocellular Carcinoma Mitochondrial Apoptosis by Stabilizing KEAP1-PGAM5 Complex

蛋白DNA互作组ChIP-Seq原理，要点，优劣势。 ChIP-Seq检测原理： ChIP-Seq检测原理和RIP-Seq类似，不同的是前者利用目的蛋白抗体将相应的DNA-蛋白复合物沉淀下来，然后分离纯化捕获DNA，结合高通量测序技术对目标DNA进行测序分析。 ChIP-Seq服务要点和RIP-Seq类似，精简如下： （1）试验设计：同RIP-Seq。 （2）蛋白表达和细胞量：比RIP-Seq细胞用量要求大，建议不少于10e7（金标准：320g离心沉淀100ul）。 （3）抗体关键质控：同IP-Mass和RIP-Seq。 （4）IP送样建议：细