这是我们课题的主要内容，请问学长学姐们能不能给点意见，我该采购哪些器材和用具？
研究目标：
拟通过对鸿雁粪便微生物总DNA的高通量测序分析，对鸿雁粪便菌群进行种属鉴定，初步分析评估其粪便微生物的种群分布状况、生理特性及对鸿雁生长发育和疾病发生的影响，为更好地保护鸿雁提出建设性意见。
主要内容：
1.采集粪便样本，提取鸿雁肠道菌群总DNA。
2.PCR扩增16SrRNA基因，割胶纯化。
3.采用高通量454焦磷酸测序技术测定全基因组序列，着重对比保守区基因保守性弱的可变区。
4.利用纯培养技术，分离纯化培养单种细菌，分别观测各种菌群的生理生化状况，结合样本鸿雁的生理状况，得出鸿雁肠道内各菌群的含量、分布状况和在动物不同生长时期以及健康或生病状况下的变化情况，推断它们与宿主健康的关系，并可能从中寻找到新活性物质加以开发利用。
（一）实施方案
（1）实验样本采集
在动物排便后，立即用无菌镊子将粪便中间部分放入无菌袋子里，收集5到8个个体粪便样品，后将样品置于准备好的干冰箱中，带回实验室置于-70度的低温冰箱中备用。
（2）粪便样品DNA的提取
将原始粪便样品解冻，各取适量且等量样品放入两毫升螺口管中，加入1mL的裂解液P（lysis buffer P）和0.3克锆珠（0.1mm,Biospec Products,Inc,USA）,置于涡旋震荡器以最大速度震荡1min，蛋白酶K消化和纯化按KingFisher instrument(Invitek,Germany)进行，使用试剂盒获得DNA，再加入RNase(1ml),摇床37度下孵育 30min，获得纯DNA，确定DNA浓度。用琼脂糖凝胶进行电泳检测DNA的大小和片段完整性，置于-20度保存备用。
(3)16S rRNA基因的PCR扩增及纯化
本实验选择细菌的16S rRNA基因的V3区进行扩增。扩增引物为:
P1 (V3F): 5'-NNNNNNNNCCTACGGGAGGCAGCAG-3'
P2 (V3R): 5'-NNNNNNNNATTACCGCGGCTGCT-3'
基因V3的扩增程序参照Zhang等(2010)和Wang等(2012)的方法进行。PCR产物用1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测,并使用Gel/PCR DNA Fragments Extraction Kit (Geneaid, UKAS)纯化。PCR产物使用Pico Green kit (Molecular Probes, USA)测定浓度。每个样本取30ng进行等量混合后再使用Gel/PCR DNA Fragments Extraction Kit(Geneaid, UKAS)进行割胶纯化。
（4）测序及数据分析
纯化后的混合DNA进行后续的454测序。使用GS FLX Titanium (Roche)系统测序。通过鸿雁粪便中各微生物的含量、基本特征、代谢产物的分析，推断微生物对鸿雁生理状况的影响。微生物含量的不同说明微生物对鸿雁的影响程度不同。基本特征、代谢产物的不同说明微生物对鸿雁的作用不同。对比不同的鸿雁各种微生物含量、基本特征、代谢产物通过对不同鸿雁，对不同鸿雁粪便中微生物的含量的研究，分析微生物量对鸿雁的影响。
研究目标：
拟通过对鸿雁粪便微生物总DNA的高通量测序分析，对鸿雁粪便菌群进行种属鉴定，初步分析评估其粪便微生物的种群分布状况、生理特性及对鸿雁生长发育和疾病发生的影响，为更好地保护鸿雁提出建设性意见。
主要内容：
1.采集粪便样本，提取鸿雁肠道菌群总DNA。
2.PCR扩增16SrRNA基因，割胶纯化。
3.采用高通量454焦磷酸测序技术测定全基因组序列，着重对比保守区基因保守性弱的可变区。
4.利用纯培养技术，分离纯化培养单种细菌，分别观测各种菌群的生理生化状况，结合样本鸿雁的生理状况，得出鸿雁肠道内各菌群的含量、分布状况和在动物不同生长时期以及健康或生病状况下的变化情况，推断它们与宿主健康的关系，并可能从中寻找到新活性物质加以开发利用。
（一）实施方案
（1）实验样本采集
在动物排便后，立即用无菌镊子将粪便中间部分放入无菌袋子里，收集5到8个个体粪便样品，后将样品置于准备好的干冰箱中，带回实验室置于-70度的低温冰箱中备用。
（2）粪便样品DNA的提取
将原始粪便样品解冻，各取适量且等量样品放入两毫升螺口管中，加入1mL的裂解液P（lysis buffer P）和0.3克锆珠（0.1mm,Biospec Products,Inc,USA）,置于涡旋震荡器以最大速度震荡1min，蛋白酶K消化和纯化按KingFisher instrument(Invitek,Germany)进行，使用试剂盒获得DNA，再加入RNase(1ml),摇床37度下孵育 30min，获得纯DNA，确定DNA浓度。用琼脂糖凝胶进行电泳检测DNA的大小和片段完整性，置于-20度保存备用。
(3)16S rRNA基因的PCR扩增及纯化
本实验选择细菌的16S rRNA基因的V3区进行扩增。扩增引物为:
P1 (V3F): 5'-NNNNNNNNCCTACGGGAGGCAGCAG-3'
P2 (V3R): 5'-NNNNNNNNATTACCGCGGCTGCT-3'
基因V3的扩增程序参照Zhang等(2010)和Wang等(2012)的方法进行。PCR产物用1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测,并使用Gel/PCR DNA Fragments Extraction Kit (Geneaid, UKAS)纯化。PCR产物使用Pico Green kit (Molecular Probes, USA)测定浓度。每个样本取30ng进行等量混合后再使用Gel/PCR DNA Fragments Extraction Kit(Geneaid, UKAS)进行割胶纯化。
（4）测序及数据分析
纯化后的混合DNA进行后续的454测序。使用GS FLX Titanium (Roche)系统测序。通过鸿雁粪便中各微生物的含量、基本特征、代谢产物的分析，推断微生物对鸿雁生理状况的影响。微生物含量的不同说明微生物对鸿雁的影响程度不同。基本特征、代谢产物的不同说明微生物对鸿雁的作用不同。对比不同的鸿雁各种微生物含量、基本特征、代谢产物通过对不同鸿雁，对不同鸿雁粪便中微生物的含量的研究，分析微生物量对鸿雁的影响。
