井伊直虎（生年不明－1582年9月12日）是日本战国时代的女性领主。远江井伊谷（现今静冈县滨松市（旧为引佐郡）引佐町）国人井伊氏的当家，并被称为“女地头”。与井伊直亲有过婚约，但却终生未婚。井伊直政的堂姐及养母。父亲是远江井伊谷的国人井伊直盛。
天文11年（1542年），祖父井伊直宗因为今川义元的命令参与三河国田原城的攻城战而战死。父亲直盛因为并无儿子，因此为她取名为次郎法师（“次郎”及“法师”为井伊氏的两个惣领名组合在一起），并且预计要将直盛的表亲直亲作为自己的婿养子。
但天文13年（1544年），因为今川氏的与力小野道高（政直）的谗言，直亲的父亲直满及其弟弟直义被怀疑要向义元谋反而被迫自杀，直亲也因此逃亡到信浓。直亲在道高死后的两年才在弘治元年（1555年）回到今川家，但因为在信浓的期间，娶了奥山亲朝之女为正室，因此与直虎的婚约只能因此解除。
永禄3年（1560年）5月，直盛在桶狭间之战中战死。直亲继承家位，但在永禄5年（1562年）因为小野道好（道高之子）的谗言而被今川氏真所杀。一族因此受到连累，但在叔父‧母亲友椿尼的哥哥新野亲矩的拥护下而获救。
永禄6年（1563年），曾祖父井伊直平在进攻天野氏的犬居城的途中去世。依据‘井伊直平公一代记’的记载，是因为喝了引间（曳马）城主饭尾连龙之妻・田鹤方（椿姬）的毒茶而死亡（远州惣剧）。永禄7年（1564年），井伊氏跟随今川氏攻入引间城并杀死新野亲矩及其重臣中野直由。身为龙潭寺住持的叔父南渓瑞闻知道后，将直亲的儿子虎松（后来的井伊直政）移送到凤来寺。
因为以上的原因，于是在永禄8年（1565年），次郎法师改名为直虎并成为井伊氏当家。
永禄11年（1568年），道好在井伊谷城施行暴政。同年，反对小野暴行的井伊谷三人众（近藤康用、铃木重时、菅沼忠久）加入德川家康手下。使家康实力大增。然后井伊氏为了复仇而攻入引间城（在丈夫死后，成为城主的田鹤方因此自杀）。元龟元年（1570年），家康就道好诬陷直亲一事加以追究并将他处死。
元龟3年（1572年）秋，将井伊谷城退让给从信浓南下经过三河的武田信玄的部将山县昌景，又在井平城的井伊直成于佛坂之战战死后逃到滨松城（引间城）。但滨松城的德川・织田连合军在三方原之战及隔年的野田城之战却一再战败，不过武田氏因为信玄病死而在4月撤退。
之后直虎将直亲的遗儿虎松（井伊直政）当作养子养育，天正3年（1575年），以3百石跟随德川家，后于天正10年（1582年）死去，家督由直政继承。
出自中文喂鸡