植物可溶性糖含量试剂盒(微量法)使用方法及注意事项

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸、研钵和蒸馏水。
产品内容：
试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存；
试剂二：10ml×1瓶，4℃保存；

操作步骤：
一、样品中可溶性糖的提取：
称取约0.1～0.2g 样本，加入1ml 蒸馏水研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，沸水浴10 min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，常温离心10min，取上清液于10ml 试管中，用蒸馏水定容至10ml，摇匀备用。
二、测定步骤：
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2. 调节水浴锅至95℃。
3. 工作液的配制：在试剂一中加入2.5 ml 试剂二。充分溶解后使用，如难溶解，可加热搅拌(用不完的试剂可4℃保存一周)。
4. 加样表（在EP管中反应)：
试剂（μl） 空白管 测定管
样本 40
蒸馏水 80 40
工作液 20 20
浓硫酸 200 200
混匀，置95℃水浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，取200μl转移至微量石英比色皿或96孔板中，于620nm 处，分别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A测定管-A空白管。

注意：
1. 空白管只要做一管。
2. 如果ΔA大于1，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
3. 由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
可溶性糖含量计算：
A． 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、 标准条件下测定的回归方程为y =8.55x - 0.07；x 为标准品浓度（mg/ ml），y 为吸光值。
2、 按样本鲜重计算
可溶性糖（mg /g 鲜重）=〔(ΔA＋0.07 ) ÷8.55×V1〕÷（W×V1÷V2）＝1.17 ×(ΔA＋0.07 ) ÷W
3、 按样本蛋白浓度计算：
可溶性糖（mg / mg prot）= 〔(ΔA＋0.07 ) ÷8.55×V1〕÷（V1×Cpr）＝0.117 ×(ΔA＋0.07 ) ÷Cpr
V1：加入样本体积，0.04ml；V2：加入提取液体积，10ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
B． 用96孔板测定的计算公式如下
1、 标准条件下测定的回归方程为y =4.275x - 0.07；x 为标准品浓度（mg/ ml），y 为吸光值。
2、 按样本鲜重计算
可溶性糖（mg /g 鲜重）=〔(ΔA＋0.07 ) ÷4.275×V1〕÷（W×V1÷V2）＝2.34 ×(ΔA＋0.07 ) ÷W
3、 按样本蛋白浓度计算：
可溶性糖（mg / mg prot）=〔(ΔA＋0.07 ) ÷4.275×V1〕÷（V1×Cpr）＝0.234 ×(ΔA＋0.07 ) ÷Cpr
V1：加入样本体积，0.04ml；V2：加入提取液体积，10ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
注意：最低检测限为1mg/g 鲜重或10ng/mg prot

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