蛋白质相互作用研究方法:
研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术不断建立和发展,如酵母杂交双技术(Y2H)、亲和层析-质谱(AP-MS)和荧光共振能量转移(FRET)的技术等揭示出细胞中大量复杂的蛋白质相互作用。在这些技术中,蛋白质片段互补技术(PCA)由于能够动态地研究体内环境中(细胞、器官甚至活体内)的蛋白质相互作用而备受关注。
PCA技术原理
实验证明许多蛋白质如果分割成2个片段,单个片段都没有活性,蛋白质功能丧失,但两个片段充分靠近,蛋白质功能恢复。
PCA就是基于将一个功能蛋白切割成N端和C端2个片段,分别与目标蛋白链接,如果两个目标蛋白相互作用,则功能蛋白片段互相靠近和重新折叠,恢复功能。
双分子荧光互补技术BIFC:该技术是将荧光蛋白在合适的位点切开形成不发荧光的2个片段,这2个片段借助融合于其上的目标蛋白的相互作用,彼此靠近,重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子,从而产生荧光。
研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术不断建立和发展,如酵母杂交双技术(Y2H)、亲和层析-质谱(AP-MS)和荧光共振能量转移(FRET)的技术等揭示出细胞中大量复杂的蛋白质相互作用。在这些技术中,蛋白质片段互补技术(PCA)由于能够动态地研究体内环境中(细胞、器官甚至活体内)的蛋白质相互作用而备受关注。
PCA技术原理
实验证明许多蛋白质如果分割成2个片段,单个片段都没有活性,蛋白质功能丧失,但两个片段充分靠近,蛋白质功能恢复。
PCA就是基于将一个功能蛋白切割成N端和C端2个片段,分别与目标蛋白链接,如果两个目标蛋白相互作用,则功能蛋白片段互相靠近和重新折叠,恢复功能。
双分子荧光互补技术BIFC:该技术是将荧光蛋白在合适的位点切开形成不发荧光的2个片段,这2个片段借助融合于其上的目标蛋白的相互作用,彼此靠近,重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子,从而产生荧光。