你好呀 蛋白复性做过吗

我想问一下，我在用一个DEAE Sepharose FF的介质，然后最近发现用缓冲液平衡柱子的时候，它流出液的ph和电导值达不到缓冲液的ph和电导值，应该如何解决

是的呢~~~

想问蛋白纯化适合女生做吗？累不累，需要做体力活吗？应届生在细胞培养和蛋白纯化中纠结。。求建议

你好楼主 我是在做蛋白质纯化的研究生，这几次的实验效果并不理想，下面我说一下我实验的步骤，请你看一下哪里需要改进，我是做混合蛋白REA（rv2299c，EAST6，ag85b）
1.在培养皿上选取一个菌落到20ml有氨苄西林的LB-broth 中，在保温箱里培育一晚上。（载体是E.COLI 质粒是bl21）
2.把昨天培育的样品转移到1L的有氨苄西林的LB-broth中，检查分光光度值，在0.4~0.6的时候滴入1ml的IPTG，在培育6~7小时，然后放入4°冷藏室一晚上。
3.用6000rpm，12分钟的条件离心分离
4.丢弃溶液，用lysis buffer 溶解沉淀，在用3000rpm，10min的离心条件清洗。
5.再使沉淀溶解在30ml lysis buffer 中，滴入60微升溶菌酶，180微升二硫苏糖醇，600微升苯甲基磺酰氟。等待2小时
6.使用声波破损，7min 每5秒暂停5秒
7.用8000rpm，20min的条件离心分离
8.丢弃溶液，使沉淀溶解在尿素中
9.等待20min，在声波破碎5min
10.用13000rpm，30min的条件离心分离30min
11.丢弃沉淀，用针头过滤上清液
12.用HIS-TAG和上清液在4°c中过一晚上
13.用不同浓度尿素洗脱
14.用SDS-PAGE选取洗脱液
15.加压浓缩选中的洗脱液
16.用半透膜先用D.W透析一晚上，再用1XPBS 透析4次
17.取出半透膜中液体，加100微升PMB 等两小时
18.3000rpm，10min 离心分离
19.观察沉淀体积，选择留取上清液体积，在沉淀中加20微升5N 氢氧化钠，在4°冷藏室等一晚上
20.用0.22针头过滤沉淀，然后测量浓度，每次浓度都不太理想 可以帮助我一下吗

肝素柱子在纯化中干了影响大不大