上世纪80年代,是牛血清研究的旺盛时期,有许多关于牛血清成分的研究报告发表。
例如,有研究指出,以往认为凝集素是一种牛血浆蛋白,它介导致敏红细胞-固相iC3b复合物的凝集。血清甘露聚糖结合蛋白(MBP)是一种甘露糖和n-乙酰氨基葡萄糖特异性凝集素。由于凝集素被n -乙酰氨基葡萄糖特异性地抑制,因此凝集素可能是牛血清MBP。,发现牛血浆中除了含有粘连素(conglutinin)外,还含有MBP。这两种蛋白在化学性质、理化性质以及结合特异性方面非常相似。两者都与末端有甘露糖和/或n -乙酰氨基葡萄糖残基的糖蛋白有高亲和力结合,尽管粘连素更喜欢n -乙酰氨基葡萄糖而不是甘露糖。
它们是大分子大小的多聚蛋白(超过1,000,000道尔顿,粘连素和MBP分别约600,000道尔顿),由一种分子量约45,000的单一亚基组成。正如最近报道的粘连素一样,MBP分子具有胶原样结构[Davis, A.E., III & Lachmann, P.J. (1984) Biochemistry 23,2139 -2144]。
尽管有这些相似之处,MBP和凝集素在免疫化学上是不同的,而且MBP没有表现出任何凝集活性。
MBP又称为甘露聚糖结合凝集素(mannan binding lectin,MBL),为一种血清C型凝集素,具有胶原样结构,能选择性识别甘露聚糖等糖基,在机体的免疫防御和监视方面发挥重要作用。
现在培养细胞大多添加胎牛血清,可见血清发挥的重要的作用。胎牛血清实际上成分非常复杂,但常规在质量控制方面只检查与质量相关的一些指标,以Ausbian特级胎牛血清为例,
它是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。所有血清出厂前均应经过严格质控,并附详细《检测报告》,如pH值、渗透压、内毒素、病毒检测、促细胞生长能力、无菌等检查。
其中,由于内毒素直接参与细胞凋亡,对细胞培养结果影响较大,且不同批次的血清,内毒素差异又不易控制。
血清中内毒素含量过高,更容易导致细胞“亚健康”,造成数据不准,或细胞状态不良、老化、甚至死亡,导致试验中断失败。血清中的内毒素越低越好。全球细胞培养学会均依据内毒素对血清的品质进行分级和命名。
内毒素含量越低的血清,级别就越高,以胎牛血清为例:
当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;
当血清中内毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml时,此血清为优级胎牛血清;
当血清中内毒素含量≥ 25EU/ml时,此血清为标准级胎牛血清;
目前,由于同一厂家,不同批次的血清,内毒素数值也可能有较大差异,因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。但使用者仍可通过检测报告,自行甄别挑选。
Ausbian特级胎牛血清会检查如下项目:包括pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内毒素、无菌检查(细菌、真菌、支原体)、病毒检查(如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等)、促细胞生长能力、细胞毒性、BVD-1/2抗体检查等。
胎牛血清对于细胞会发挥如下作用:
1. 提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调节它们所结合的物质活力。
3. 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4. 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5. 起酸碱度缓冲作用。
6. 提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
7. 参与细胞冻存。
在细胞培养中,胎牛血清加入基础培养基的浓度大多为5%~20%(最常见为10%)的。具体到不同试验,应依据文献报导,或细胞类型或基础培养基的成分来确定最佳浓度。
胎牛血清应在-20℃储存,运输应干冰冷链运输,避免反复冻融,确保血清中因子活性不受影响,保证血清优良品质。
参考文献:
N Kawasaki, T Kawasaki, I Yamashina
Mannan-binding protein and conglutinin in bovine serum
J Biochem. 1985 Nov;98(5):1309-20. doi: 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a135398.
(缔一生物)
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例如,有研究指出,以往认为凝集素是一种牛血浆蛋白,它介导致敏红细胞-固相iC3b复合物的凝集。血清甘露聚糖结合蛋白(MBP)是一种甘露糖和n-乙酰氨基葡萄糖特异性凝集素。由于凝集素被n -乙酰氨基葡萄糖特异性地抑制,因此凝集素可能是牛血清MBP。,发现牛血浆中除了含有粘连素(conglutinin)外,还含有MBP。这两种蛋白在化学性质、理化性质以及结合特异性方面非常相似。两者都与末端有甘露糖和/或n -乙酰氨基葡萄糖残基的糖蛋白有高亲和力结合,尽管粘连素更喜欢n -乙酰氨基葡萄糖而不是甘露糖。
它们是大分子大小的多聚蛋白(超过1,000,000道尔顿,粘连素和MBP分别约600,000道尔顿),由一种分子量约45,000的单一亚基组成。正如最近报道的粘连素一样,MBP分子具有胶原样结构[Davis, A.E., III & Lachmann, P.J. (1984) Biochemistry 23,2139 -2144]。
尽管有这些相似之处,MBP和凝集素在免疫化学上是不同的,而且MBP没有表现出任何凝集活性。
MBP又称为甘露聚糖结合凝集素(mannan binding lectin,MBL),为一种血清C型凝集素,具有胶原样结构,能选择性识别甘露聚糖等糖基,在机体的免疫防御和监视方面发挥重要作用。
现在培养细胞大多添加胎牛血清,可见血清发挥的重要的作用。胎牛血清实际上成分非常复杂,但常规在质量控制方面只检查与质量相关的一些指标,以Ausbian特级胎牛血清为例,
它是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。所有血清出厂前均应经过严格质控,并附详细《检测报告》,如pH值、渗透压、内毒素、病毒检测、促细胞生长能力、无菌等检查。
其中,由于内毒素直接参与细胞凋亡,对细胞培养结果影响较大,且不同批次的血清,内毒素差异又不易控制。
血清中内毒素含量过高,更容易导致细胞“亚健康”,造成数据不准,或细胞状态不良、老化、甚至死亡,导致试验中断失败。血清中的内毒素越低越好。全球细胞培养学会均依据内毒素对血清的品质进行分级和命名。
内毒素含量越低的血清,级别就越高,以胎牛血清为例:
当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;
当血清中内毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml时,此血清为优级胎牛血清;
当血清中内毒素含量≥ 25EU/ml时,此血清为标准级胎牛血清;
目前,由于同一厂家,不同批次的血清,内毒素数值也可能有较大差异,因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。但使用者仍可通过检测报告,自行甄别挑选。
Ausbian特级胎牛血清会检查如下项目:包括pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内毒素、无菌检查(细菌、真菌、支原体)、病毒检查(如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等)、促细胞生长能力、细胞毒性、BVD-1/2抗体检查等。
胎牛血清对于细胞会发挥如下作用:
1. 提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调节它们所结合的物质活力。
3. 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4. 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5. 起酸碱度缓冲作用。
6. 提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
7. 参与细胞冻存。
在细胞培养中,胎牛血清加入基础培养基的浓度大多为5%~20%(最常见为10%)的。具体到不同试验,应依据文献报导,或细胞类型或基础培养基的成分来确定最佳浓度。
胎牛血清应在-20℃储存,运输应干冰冷链运输,避免反复冻融,确保血清中因子活性不受影响,保证血清优良品质。
参考文献:
N Kawasaki, T Kawasaki, I Yamashina
Mannan-binding protein and conglutinin in bovine serum
J Biochem. 1985 Nov;98(5):1309-20. doi: 10.1093/oxfordjournals.jbchem.a135398.
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