(1)抗体染色不充分
增加抗体浓度,延长孵育时间。
(2)酶失活
直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。
(3)标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低
设置阳性对照,如果阳性对照有结果,但标本没有则可能是标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量低的原因。
(4)试剂不匹配
一抗与组织种属,一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配。通过设置内参照可以验证二级检测系统的有效性。
(5)一抗失效
选择在有效期内抗体;并选择现配现用的工作液。
(6)HRP抑制剂
所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。