土壤中含有很多种酶，纤维素酶是其中的一种。纤维素酶的作用是将纤维素降解为葡萄糖，它实际上是蛋白质，要测定它的活性，一般是采用分光光度法进行的。纤维素是植物在土壤中残留的主要碳水化合物，在纤维素酶的作用下，初步水解为纤维二糖。纤维二糖，继续分解为葡萄糖。纤维素酶解的过程中生成的还原糖能够和3,5- 二硝基水杨酸一起反应，生产橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。根据这个特征，可以通过颜色的深浅变化，来判断酶解的程度，也就是这个纤维素酶的活力怎么样。
自然界中的纤维素酶提纯是比较难的，现在为了科学研究，我们以葡萄糖作为标准物质来测定土壤纤维素酶活。
在实验的过程中，需要用到的设备包括恒温培养箱，水浴锅，分光光度计，搅拌器和三角瓶。在这个过程中，关键的地方就是为了让酶充分发挥它的能力，使得纤维素可以尽可能的被酶成葡萄糖。而影响它的因素，主要是缓冲液和温度。因此，我们就取5.00g的新鲜土壤，在100ml三角瓶中，加入醋酸缓冲液，在50℃下培养24h，过滤。同时做空白对照。
取2.0ml的过滤液到50ml的容量瓶，用去离子水定量到50ml。取2.0ml稀释液于20ml试管中，加入2.0ml还原糖试剂（无水碳酸钠+氯化钾+六氰铁钾溶液），这个步骤需要先配置好溶液备用，具体参考相关的国标或检测说明。盖紧摇匀，在100℃的水浴中加热15min，然后马上在20℃水浴中冷却5min。再加入还原糖试剂（硫酸铁铵+十二烷基硫酸钠+浓硫酸溶液）10ml，混匀后，在20℃静置显色60min。在690nm的波长出检测，这个测定的过程要抓紧时间了，必须在30min内完成。时间太长了，颜色就不那么稳定了，结果容易出现偏差。
分别吸取0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,10.ml的水合葡萄糖溶液，用去离子水稀释定容到2.0ml，同时和上面的操作一样，在分光光度计上测定数据，可以做两次重复，计算平均值。根据吸光度和浓度之间的关系，可以制作出来一条标准曲线。根据标准曲线的结果，计算出来土壤中所含的纤维素酶的活力。
来源：上海优选生物。还有生化和elisa试剂盒，多着呢。
自然界中的纤维素酶提纯是比较难的，现在为了科学研究，我们以葡萄糖作为标准物质来测定土壤纤维素酶活。
在实验的过程中，需要用到的设备包括恒温培养箱，水浴锅，分光光度计，搅拌器和三角瓶。在这个过程中，关键的地方就是为了让酶充分发挥它的能力，使得纤维素可以尽可能的被酶成葡萄糖。而影响它的因素，主要是缓冲液和温度。因此，我们就取5.00g的新鲜土壤，在100ml三角瓶中，加入醋酸缓冲液，在50℃下培养24h，过滤。同时做空白对照。
取2.0ml的过滤液到50ml的容量瓶，用去离子水定量到50ml。取2.0ml稀释液于20ml试管中，加入2.0ml还原糖试剂（无水碳酸钠+氯化钾+六氰铁钾溶液），这个步骤需要先配置好溶液备用，具体参考相关的国标或检测说明。盖紧摇匀，在100℃的水浴中加热15min，然后马上在20℃水浴中冷却5min。再加入还原糖试剂（硫酸铁铵+十二烷基硫酸钠+浓硫酸溶液）10ml，混匀后，在20℃静置显色60min。在690nm的波长出检测，这个测定的过程要抓紧时间了，必须在30min内完成。时间太长了，颜色就不那么稳定了，结果容易出现偏差。
分别吸取0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,10.ml的水合葡萄糖溶液，用去离子水稀释定容到2.0ml，同时和上面的操作一样，在分光光度计上测定数据，可以做两次重复，计算平均值。根据吸光度和浓度之间的关系，可以制作出来一条标准曲线。根据标准曲线的结果，计算出来土壤中所含的纤维素酶的活力。
来源：上海优选生物。还有生化和elisa试剂盒，多着呢。
