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植物亚硝酸还原酶活性测定

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亚硝酸还原酶是一类能够催化亚硝酸盐还原的酶类,亚硝酸还原酶大多存在细胞的内部,能够有效的降解掉细胞内多余的亚硝酸盐。催化的过程中,需要电子供体和传递体的参与,可以在无氧的条件下进行。亚硝酸盐在植物或微生物的体内,被酶降解为NO或NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低亚硝酸盐对生物体的伤害。它是氮循环过程中的一个关键酶,检测亚硝酸盐含量的方法有分光光度法、荧光分析法和高效液相色谱(HPLC)法等。

比色法测定原理:亚硝酸还原酶可将NO2-还原为NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少,即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
配制试剂:Tris-HCl缓冲液,磷酸钾缓冲液,甲基紫精,连二亚硫酸钠。
样品检测:取植物样品,在缓冲液中,冰浴研磨,吸取1mL加入离心管,离心2分钟,提取上清液 。

检测过程:0.1mL提取液+1mL磷酸钾缓冲液+0.05mLKNO2+0.05mL甲基紫精(对照品不加,以磷酸钾缓冲液代替)+0.05mLH2O,最后加0.05mL连二亚硫酸钠,反应开始了。涡流混匀,振荡至甲基紫精的蓝紫色都褪去。在25℃孵育30min,迅速取0.4mL反应液,加H2O3.6mL,加1mL磺胺,加1mL萘胺,反应30min后,在540nm的波长处检测吸光度值。根据标准曲线,计算出样品中的亚硝酸盐还原酶活力。
来源:上海优选生物。欢迎咨询,交流科研。


IP属地:上海1楼2024-05-21 15:39回复