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关于 CCK8,师姐的这些经验你有听过吗?

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CCK8 属于一种常见实验,不管是对细胞增殖速度进行检测,还是对药物的 IC50 予以测定,都必定会涉及到对 CCK8 的测量。计算细胞增殖率:(实验组OD-空白组OD)/(对照组OD-空白组OD),然而 CCK8 的结果好似极为不稳定,复孔间差距较大,趋势也难以捉摸。
1 种板细胞量: 铺板时,要依据培养时长以及细胞生长速度来确定接种的细胞数量,而并非固定于某一个数值。若细胞生长快速,培养时间较长,那就应当少种些细胞,避免在测量过程中有部分孔已长满,在后续检测时细胞过于密集而影响结果;而对于生长较慢的细胞,接种密度则应适当提高,否则可能难以观察到明显的变化。在进行预实验时,可以设置一系列不同密度梯度进行尝试,找到最适合该细胞类型和实验目的的密度范围。2 空白对照: 除开对照组外,切记要设定一个不含细胞的空白培养基孔!在不含细胞的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度作为空白对照。3 铺板均匀的办法: 96 孔板无需润板,直接添加 100ul 细胞悬液,不建议先加 50ul 培养基再添加 50ul 细胞悬液。在制备细胞悬液的过程中,需多次轻柔吹打,保证细胞悬液均匀混合,减少细胞团块的形成。4 两种添加 CCK-8 的方式:① 直接向各个孔内加入 10 微升的 CCK-8 原液。其缺点为:10 微升的 CCK-8 量较少,或许会因黏附在孔壁上而产生误差。② 配置含有 10% CCK-8 的培养基,并通过换液的形式进行添加。但要注意防止产生气泡,可利用负压吸引器或者注射器吸走培养基,也能用大枪头套小枪头。添加时也要留意不可产生气泡,且不要对着底部直接打出液体。5 反应时间: 在 1 至 4 小时内均可进行测量。倘若每天测一次以制作增殖曲线,需记得每天都处理相同时间。6 复孔: 种板时可多设置一些复孔,例如 5 个以上。如此能提升实验的可靠性。


IP属地:河北1楼2024-06-14 16:42回复