ChIRP-MS和RNA pulldown-WB实验,发现AZGP1, DSG1和KRT16证明与circNOLC1存在互作(图1a-c)。因AZGP1在CRC中高表达,且在葡萄糖代谢中发挥重要作用,故将其作为研究对象。RIP实验发现circNOLC1在anti-AZGP1下拉物中显著富集(图1d)。为了确定circNOLC1与AZGP1互作区域,设计circNOLC1缺失突变体,进行RNA pulldown实验,表明circNOLC1的nt 91-150是circNOLC1与AZGP1相互作用必需的(图1e)。
进一步检测发现,circNOLC1仅调控AZGP1蛋白水平,用蛋白酶体抑制剂处理细胞显示MG132显著提高AZGP1蛋白水平,暗示circNOLC1阻碍AZGP1蛋白降解(图1f)。此外,功能回复实验结果表明circNOLC1通过AZGP1激活mTOR/SREBP/G6PD信号通路来增强PPP(图1g和h)。
图1
文献解读全文分享可查阅:【《Adv Sci》解读:极为少见!CircNOLC1同时与AZGP1和miR-212-5p结合调控促进结直肠癌肝转移】。
如有相关科研问题,欢迎留言探讨。
进一步检测发现,circNOLC1仅调控AZGP1蛋白水平,用蛋白酶体抑制剂处理细胞显示MG132显著提高AZGP1蛋白水平,暗示circNOLC1阻碍AZGP1蛋白降解(图1f)。此外,功能回复实验结果表明circNOLC1通过AZGP1激活mTOR/SREBP/G6PD信号通路来增强PPP(图1g和h)。
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