第一步，ENO1促进PD-L1与STUB1的结合
据报道，ENO1通过募集E3连接酶STUB1调节PD-L1的蛋白酶体降解。敲减STUB1，PD-L1表达增加（图1a）。IP-WB实验发现PD-L1泛素化降低，证实STUB1是CRC细胞中PD-L1的E3连接酶（图1a）。此外，ENO1的缺失增加了PD-L1水平，IP-WB显示PD-L1泛素化降低，重新表达WT ENO1逆转了这种效应（图1b-c）。相反，过表达ENO1可抑制PD-L1的表达，敲减STUB1，则抑制作用被消除（图1d）。另外，内源性Co-IP实验发现ENO1的缺失抑制PD-L1与STUB1互作（图1e），而ENO1过表达则以剂量依赖性的方式增强PD-L1与STUB1互作（图1f）。GST pulldown实验也证实该结果（图1g）。表明ENO1促进了PD-L1与STUB1的结合。
第二步，ENO1糖基化通过减少PD-L1与STUB1的结合来抑制PD-L1的蛋白酶体降解
推测ENO1糖基化通过减少PD-L1与STUB1的结合来抑制PD-L1的蛋白酶体降解（图1h）。为了验证这一点，Co-IP分析发现，在WT ENO1过表达细胞中，TMG处理后，降低PD-L1泛素化及其与STUB1的互作，但在S249A ENO1过表达细胞中没有降低（图1i）。此外，WB检测显示，过表达OGT可增强WT ENO1过表达细胞中PD-L1的表达，而在S249A ENO1过表达细胞中则无此作用。而敲减STUB1抵消这种增加（图1j）。
表明ENO1糖基化阻断了其与PD-L1的相互作用，减少了STUB1与PD-L1的相互作用，从而抑制了STUB1介导的泛素化和PD-L1的蛋白酶体降解。
全文分享可查阅：【《PNAS》解读：糖基化修饰影响酶活和蛋白互作！烯醇化酶1的O-糖基化在结直肠癌中作为有氧糖酵解和免疫逃避的双重调节因子】。
如有相关科研问题，欢迎来询探讨。
据报道，ENO1通过募集E3连接酶STUB1调节PD-L1的蛋白酶体降解。敲减STUB1，PD-L1表达增加（图1a）。IP-WB实验发现PD-L1泛素化降低，证实STUB1是CRC细胞中PD-L1的E3连接酶（图1a）。此外，ENO1的缺失增加了PD-L1水平，IP-WB显示PD-L1泛素化降低，重新表达WT ENO1逆转了这种效应（图1b-c）。相反，过表达ENO1可抑制PD-L1的表达，敲减STUB1，则抑制作用被消除（图1d）。另外，内源性Co-IP实验发现ENO1的缺失抑制PD-L1与STUB1互作（图1e），而ENO1过表达则以剂量依赖性的方式增强PD-L1与STUB1互作（图1f）。GST pulldown实验也证实该结果（图1g）。表明ENO1促进了PD-L1与STUB1的结合。
第二步，ENO1糖基化通过减少PD-L1与STUB1的结合来抑制PD-L1的蛋白酶体降解
推测ENO1糖基化通过减少PD-L1与STUB1的结合来抑制PD-L1的蛋白酶体降解（图1h）。为了验证这一点，Co-IP分析发现，在WT ENO1过表达细胞中，TMG处理后，降低PD-L1泛素化及其与STUB1的互作，但在S249A ENO1过表达细胞中没有降低（图1i）。此外，WB检测显示，过表达OGT可增强WT ENO1过表达细胞中PD-L1的表达，而在S249A ENO1过表达细胞中则无此作用。而敲减STUB1抵消这种增加（图1j）。
表明ENO1糖基化阻断了其与PD-L1的相互作用，减少了STUB1与PD-L1的相互作用，从而抑制了STUB1介导的泛素化和PD-L1的蛋白酶体降解。
全文分享可查阅：【《PNAS》解读：糖基化修饰影响酶活和蛋白互作！烯醇化酶1的O-糖基化在结直肠癌中作为有氧糖酵解和免疫逃避的双重调节因子】。
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