circCFL1直接与HDAC1互作
一、初步筛选出与circCFL1的互作蛋白分子HDAC1
为了阐明circCFL1对TNBC影响的潜在分子机制，进行RNA pull down实验，对显著富集的55 kD蛋白进行质谱分析（图1a），发现HDAC1是circCFL1的高潜蛋白（图1b）。分子对接显示circCFL1与HDAC1蛋白存在物理结合（图1c）。
二、确定circCFL1与HDAC1存在互作
FISH和IF检测发现circCFL1和HDAC1在细胞核中共定位（图1d）。RNA pull down-WB实验证实circCFL1和HDAC1相互作用（图1e）。
三、确定circCFL1与HDAC1结合的特定区域
首先，基于RNAfold预测的circCFL1茎环结构构建两个截断的同工型circCFL1，RNA pull down-WB实验发现两个亚型都可以与HDAC1相互作用（图1f-g）。进一步的HDAC1抗体RIP-qPCR实验，再次证实HDAC1与circCFL1相互作用（图1h）。随后的HDAC1截断体RIP-qPCR实验显示：circCFL1主要与HDAC1的去乙酰化结构域相互作用（图1i-j）。
四、探索circCFL1是否可以调节HDAC1的表达
circCFL1敲低和过表达不影响HDAC1的RNA或蛋白质水平，表明circCFL1不影响HDAC1的蛋白水平（图1k-l）。但HDAC1敲减表达能够有效抑制circCFL1的促癌功能（增殖、迁移、侵袭和干性）（图1m-o）。这些结果表明：circCFL1主要是通过影响HDAC1的生物学功能发挥促癌功能。
《Adv Sci》解读：去乙酰化与泛素化协同！circCFL1 桥接脱乙酰化和去泛素化调控促进 TNBC 干性和免疫逃逸。
如有相关科研问题，欢迎留言探讨。
一、初步筛选出与circCFL1的互作蛋白分子HDAC1
为了阐明circCFL1对TNBC影响的潜在分子机制，进行RNA pull down实验，对显著富集的55 kD蛋白进行质谱分析（图1a），发现HDAC1是circCFL1的高潜蛋白（图1b）。分子对接显示circCFL1与HDAC1蛋白存在物理结合（图1c）。
二、确定circCFL1与HDAC1存在互作
FISH和IF检测发现circCFL1和HDAC1在细胞核中共定位（图1d）。RNA pull down-WB实验证实circCFL1和HDAC1相互作用（图1e）。
三、确定circCFL1与HDAC1结合的特定区域
首先，基于RNAfold预测的circCFL1茎环结构构建两个截断的同工型circCFL1，RNA pull down-WB实验发现两个亚型都可以与HDAC1相互作用（图1f-g）。进一步的HDAC1抗体RIP-qPCR实验，再次证实HDAC1与circCFL1相互作用（图1h）。随后的HDAC1截断体RIP-qPCR实验显示：circCFL1主要与HDAC1的去乙酰化结构域相互作用（图1i-j）。
四、探索circCFL1是否可以调节HDAC1的表达
circCFL1敲低和过表达不影响HDAC1的RNA或蛋白质水平，表明circCFL1不影响HDAC1的蛋白水平（图1k-l）。但HDAC1敲减表达能够有效抑制circCFL1的促癌功能（增殖、迁移、侵袭和干性）（图1m-o）。这些结果表明：circCFL1主要是通过影响HDAC1的生物学功能发挥促癌功能。
《Adv Sci》解读：去乙酰化与泛素化协同！circCFL1 桥接脱乙酰化和去泛素化调控促进 TNBC 干性和免疫逃逸。
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