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琼脂糖凝胶电泳实验流程

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做实验必备的琼脂糖凝胶电泳,今天一次性给你讲清楚,速速收藏!
🌈一、原理
1️⃣电泳效应:带负电荷的DNA、RNA在电场中向正极移动,是电泳基础。
2️⃣分子筛效应:琼脂糖凝胶像筛子,小分子跑得快,大分子跑得慢,实现分离。
🌈二、制备凝胶
1️⃣称量:按需称取琼脂糖,浓度0.7%-2%,比如0.8%的凝胶,100ml缓冲液需0.8g琼脂糖。
2️⃣溶解:将琼脂糖放入容器,加缓冲液,微波炉加热至完全溶解,液体澄清。
3️⃣冷却加染料:冷却至50-60℃,加入核酸染料,浓度万分之二。
4️⃣倒胶插梳子:倒入模具,水平放置,插入梳子,注意别穿破凝胶。
5️⃣冷却固化:室温冷却30分钟,凝胶固化后小心拔梳子。
🌈三、准备样品
1️⃣提取:按需提取DNA或RNA,质粒DNA来自大肠杆菌,基因组DNA来自真核细胞或组织。
2️⃣纯化:用酚-氯仿抽提、乙醇沉淀等方法,去除杂质。
3️⃣定量:用分光光度计或荧光染料测浓度,确保电泳能看清条带。
4️⃣准备上样缓冲液:含甘油或蔗糖增加密度,有染料监控迁移。
5️⃣混合样品:按比例混合样品和上样缓冲液,5μL样品加1μL缓冲液。
6️⃣加热样品(可选):RNA或变性DNA需85℃加热2-5分钟变性。
7️⃣上样:小心将样品加入凝胶孔,避免气泡和破坏凝胶。
🌈四、电泳
1️⃣准备电泳槽:将凝胶放入电泳槽,加缓冲液,负极在左,正极在右。
2️⃣加载样品:将样品和DNA ladder加入孔中,小心避免溢出。
3️⃣连接电源:确保电极连接正确,负极接凝胶孔端。
4️⃣设置电压和运行时间:电压90-150V,时间30分钟到2小时,定期检查缓冲液。
5️⃣观察记录结果:紫外灯下观察,用成像系统记录结果,分析条带。
按照这些步骤,琼脂糖凝胶电泳轻松搞定!


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