大家好，我做过4年的IHC\IF、和病理，希望大家有什么问题 留下来 。我回及时回复~ 谢谢~

请问怎么选择图像分析的方法，一般分析哪个值？有的文献是积分光密度，有的是灰度值，有的数阳性细胞数，下面这些值怎样区分选择呢？ 积分光密度，平均光密度，面密度，灰度值等等分别是代表什么？ 谢谢。

1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用

双重免疫组化的步骤？ 1、切片脱蜡至水 2、阻断内源性过氧化物酶(198毫升甲醇或水+2毫升30% H2O2)室 温20分钟。 3、pH7.2缓冲液洗三次。 4、胰蛋白酶消化37 ℃，30分钟。（或按说明书要求：放入抗原修复液内微波修复20分钟、或电炉加热30分钟、或高压锅加帽出气后3分钟，快速冷却；或不处理） 6、滴加正常血清37 ℃，30分钟。（可不用） 7、擦去多余血清，加一抗37 ℃，30分钟。 8、pH7.2缓冲液洗三次。 9、滴加生物素化二抗，37 ℃，30分钟。 10、p

PH 7.6 7.4 7.2 7.0 H2O 1000 1000 1000 1000 NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5 Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2 NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4

High expression of Cell proliferation Index is considered as a mark of malignant tumor and associated with poor prognosis.Ki-67 and PCNA are widely used for evaluating cell proliferation and accumulating evidence has confirmed that the two marker are probably not as effective as Mcm2 because ki-67 is absent in early G1-phase and PCNA is less specific for determining proliferation since it is also present DNA repair processes. MCM proteins stand at the end of many signalling pathways involved in cellproliferation . They ensure that synthesis of DNA is initiated only once during each cell cyc

如题。使用这两种切片在免疫组化步骤上有何不同？结果的准确性哪个更好。

有没有比较详细一些的资料？或者是需要自学什么书，通过什么方式学习会比较好？

我打算用大鼠脑组织做免疫组化，这个组织最多保存多久后还可以做免疫组化？如何保存？

我现在想做的一个蛋白，查询了很多公司没有现成的抗体卖，所以只能用合成的。请问一下合成的抗体效果怎么样，有哪些公司可以帮合成抗体，哪里合得好一些？ 谢谢：））

做免疫组化时，用单抗还是多抗好？ 特一行又和不同？

请问免疫组化做完后，怎么对阳性细胞进行定量分析

我的组织样本都储存在液氮中，请问还可以做免疫组化吗？十分感谢！

免疫组化以稳定性差著称，过程不难，但是染好却很难。什么共染、飞片等。 首先是安排好时间，一般至少4个小时的时间才行；但是事先得按说明书的参考稀释浓度稀释抗体，但不完全局限于说明书。 免疫组化有三个对照，阴性对照、阳性对照和空白（PBS）对照，一般用阳性对照摸浓度。阴性对照可以作为控制共染的参照物。 确定好阴性对照和阳性对照后，就要着手搜集标本了。 一般一抗的合适浓度在1:200-1:300左右，但也不绝对有的抗体的反应

免疫组化的试剂主要由100％二甲苯，梯度酒精（100、95、75％）、PBS/TBS、3%双氧水、抗体封闭剂、酶底物(DAB常用)、苏木素、盐酸酒精、中性树胶、蒸馏水、柠檬酸修复液等 各试剂都有成品或包括在试剂盒中，但是如果愿意自己配也很好。

蛋白质组学的方法包括很多，免疫组化、免疫荧光（免疫细胞化学）、western blot、elisa、免疫沉淀或共沉淀等。其中免疫组化是最经典的一个，它是由Nakane在1967年创建的，免疫酶组织化学技术是目前开展免疫组织化学技术最常用的方法。