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00000000001000000000模式动物的选择 所用实验动物有大鼠、猪、狗、家兔、小鼠、羊、狒狒,其中大鼠做为模式动物的使用率最高,其次是猪。 今天一起了解下鼠作为实验动物,是如何开展实验的? 造模方法 目前应用最多的脑死亡建模方法,是颅内加压法,采用颅内水囊或气囊占位,即颅内置留可扩张性气囊,囊内充气或充水,使颅内压急剧或缓慢上升。 通过升高颅内压使全脑组织受损从而进行脑死亡过程的诱导,同时监测各项生理指标用以判断脑死亡。 按颅内压升00一、外泌体RNA提取重要性 外泌体是直径30-150 nm的细胞外囊泡,携带母细胞的蛋白质、脂质和核酸信息。其中,外泌体RNA因其稳定性高、功能多样,成为研究细胞间调控机制的关键分子。例如: •肿瘤标志物:血液外泌体中的miRNA可反映肿瘤进展。 •疾病治疗:外泌体RNA参与免疫调节和信号通路调控。 •无创诊断:相比组织活检,体液(如血液、尿液)中的外泌体RNA更易获取。 但外泌体RNA含量极低(仅占外泌体总成分的约1%),且易被降解,如何高效0实验方法 (1)大鼠糖水偏爱实验 训练期:动物应单笼饲养,进行 48 h 的蔗糖饮水训练。前 24 h 给予两瓶 1% ~ 2%蔗糖水,后 24 h,一瓶给予 1% ~ 2%蔗糖水,另一瓶给予饮用纯水(中途交换两个水瓶位置)。大鼠禁食禁水 14 ~ 23 h 后,进行糖水偏爱指数的测定:测定 1 h 内大鼠对两瓶水的饮用量(g)。 (2)小鼠糖水偏爱实验操作流程同大鼠。但在 48 h 饮水训练时,应全程给予 1% ~ 2%蔗糖水和饮用水(中途交换两个水瓶位置)。训练期结束后,禁水(不禁食)9 ~ 16 h,测定 8 ~ 15 h 内(中间宜0Hepal-6细胞诱发C57BU76J小鼠原位肝癌模型 造模方法:小鼠肝脏原位注射106个Hepal-6细胞,在注射后第10天用超声仪观察肝脏接种部位并记录,处死,取材,进行肝组织病理学检查。 模型特点:Hepal-6细胞悬液注射到C57BL/6J小鼠肝内后可在小鼠体内直接成肿瘤,这种方法不需要先期的体内适应过程,而且C57B小鼠具有顽强的抵抗力,容易饲养,也不需要特殊的环境,具有操作简单、建模周期短、成功率高的特点。Hep_G2细胞株建立裸鼠肝癌模型 造模方法:皮下0一、腹腔注射 小鼠腹腔注射的位置在下腹部腹中线两侧0.5cm处,未免伤及脏器,保定小鼠时需使其头部稍向后仰,以使其下腹部脏器上移。 ① 抓取小鼠,使其头部稍向后仰,以75%酒精棉球消毒注射部位。 ②抓紧背部皮肤使使腹部皮肤紧绷,于两大腿根连线与腹中线交叉点一侧约0.5厘米位置刺入皮下。 ③在皮下平行腹中线推进针头3-5mm,再以45°角向腹腔内刺入。注意:穿透腹膜后,针尖的阻力消失。 ④针尖通过腹肌后,抵抗力消失,回抽无回流物,0动物的选择 小鼠、大鼠。 Wistar大鼠 其中,Wistar大鼠和SD大鼠并没有明显种异性,SD大鼠的性情较为暴戾,而Wistar大鼠性情温顺容易饲养,所以建立大鼠肥胖模型时Wistar大鼠相对SD大鼠更为方便。并且相关研究表明长期的高脂饲料喂养后Wistar大鼠的肥胖效果要优于SD大鼠,然而目前国内报道的构建肥胖大鼠模型以SD大鼠居多,Wistar大鼠的相关数据缺乏。所以,我们常选用Wistar大鼠。 小鼠 近交系C57BL/6J小鼠因易发生严重肥胖、脂肪堆积、葡萄糖不耐受和中00慢性疲劳综合征(Chronic fatigue syndrome,CFS),也称为系统性劳累不耐受疾病 (Systemic exertion intolerance disease,SEID),是指以持续或反复发作6个月以上的较重程度疲劳为主要表现,且临床相关体格检查、实验室指标、影像学检查无明显异常的一组症候群。 现代医学对CFS的确切病因仍不清楚,但CFS动物造模方法很多,今天小编和大家一起梳理下~ 动物的选择 小鼠、大鼠。 造模方法 分为单因素造模方法和多因素造模方法。 一单因素造模方法 01强制游泳 由于慢0给医药公司投了很多的简历,几十个hr一听是非全兽医专硕就不回复了。我现在是一位应届本科生,考研失利。想调剂非全,去做实验动物兽医。能给些建议吗?001 动物的选择 大鼠、小鼠。 02 造模方法 主要分为以下2种: 甲状腺功能亢进(简称甲亢)肾阴虚证模型、肾上腺皮质功能亢进肾阴虚证模型。不同动物模型建立方法各有优缺点,其中甲亢模型是目前阴虚造模最常用的方法。 甲亢肾阴虚证模型 方法:选取清洁级雄性SD大鼠实验,除正常组外每只大鼠每日按30mg/kg灌胃甲状腺素片混悬液或者2.5mg/kg甲状腺素造模,灌胃21d后造模成功。 特点:采用灌胃甲状腺片混悬液的方法复制出甲亢型肾阴虚证模型,造模0动物的选择 SD大鼠、Wistar大鼠、C57小鼠、昆明小鼠。 造模方法 一、单因素造模方法 1、苦寒泻下法 根据”大忌苦寒之药损其脾胃“的论述,选取昆明种雄性小鼠进行试验,给予中药大黄煎剂1g/mL进行造模,发现模型组动物出现体质量减轻并有纳怠、少动、四肢无力、脱肛、便溏、毛发枯涩、畏寒、耐寒力低等与临床相似的“脾气虚”症状,以四君子汤反证,则症状好转。 2、饮食不节法 依据“饮食自倍,脾胃乃伤”理论采用过食肥甘厚腻方法给小鼠000一、基本原理 小动物活体成像技术利用光可以穿透实验动物组织并被仪器量化检测到的特性。当光穿透动物组织时,其强度与细胞数量存在一定的关系,因此可以通过量化检测到的光强度来间接反映体内的细胞数量。 二、标记原理 01生物发光:通过将荧光素酶基因(如Fluc基因)整合到细胞的DNA中,使细胞表达荧光素酶。在注射荧光素底物后,荧光素酶在活细胞内催化发光,其发光强度与细胞数量相关。这种发光是由细胞内的化学反应产生的,无需外00慢性间歇性缺氧(Chronic Intermittent Hypoxia, CIH)模型通常用于模拟睡眠呼吸暂停等疾病的研究,比如OSA(阻塞性睡眠呼吸暂停)。所以造模方法可能涉及将动物暴露在周期性变化的氧气浓度中,模拟呼吸暂停导致的缺氧和复氧过程。 动物的选择: SD大鼠或C57BL/6小鼠。 造模过程: 随机将 48 只 SD 大鼠分为轻度慢性间歇性缺氧组(n=12)、中度慢性间歇性缺氧组(n=12)和重度慢性间歇性缺氧组(n=12)和正常对照组(n=12)。组装调试饲养舱,调节舱内氧浓0球球,孩子找不到相关文献0一、常见内参类型 1、全细胞或胞质内参 GAPDH:分子量约36kDa,是一种广泛存在的蛋白,适用于多种细胞类型。 β-肌动蛋白:分子量约42kDa,作为经典的持家蛋白,在各种组织中表达稳定,常被用作内标。 β-微管蛋白:分子量约55kDa,也是常用的内标之一。 2、亚细胞器内参 核膜内参:如核纤层蛋白B1(Lamin B1),分子量约66-72kDa。 核内蛋白内参:如组蛋白H3,分子量约17kDa。 膜内参:如钠/钾离子转运ATP酶α1肽(ATP1A1),分子量约110kDa。 线粒体内参:如0一、实验步骤 1.细胞固定: 首先检查细胞的传代情况。打开含有预置细胞爬片的细胞培养板,在每个孔中滴加适量组织固定液,固定细胞15分钟。之后,用超纯水洗涤孔板3到4次,去除固定液残留,确保细胞的洁净。 2.细胞破膜:使用组化笔在细胞分布均匀的区域画圈,以防止抗体流失。随后加入3毫升破膜液,室温下孵育20分钟。破膜后,用PBS缓冲液洗涤三次,每次5分钟,彻底去除破膜液。 3.血清封闭:在标记的圈内均匀滴加由牛血清蛋白配制的3% BSA0PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)是一种分子生物学技术,用于在生物体外快速、大量地复制特定的DNA片段。尽管PCR实验的原理和操作流程看似简单,但实际操作中却存在许多潜在的问题。以下是一些常见的PCR实验问题及相应的解决方案。 01拖尾、弥散现象 • 可能原因:体系配置偏差(如酶用量、dNTP、镁离子浓度过高)、扩增循环数过多、PCR体系中存在污染、电泳缓冲液不净、电压不稳定、退火时间不当、模板不纯等。 • 解决方案:减少0癌症转移是指癌细胞从原发肿瘤部位脱离,通过血液或淋巴系统传播到身体其他部位,并在这些新位置形成新的肿瘤的过程。这一过程是导致多数癌症相关死亡的主要原因。转移过程通常包括以下几个步骤:局部侵袭、血管内渗(进入血液循环)、生存于循环中、血管外渗(离开血液循环进入目标组织)以及在新位置的生长和增殖。 尽管已知某些脂质相关的变化对于癌细胞的外渗至关重要,但关于具体哪些脂质成分支持癌细胞在新环境下的存活与生0杂菌污染是实验过程中屡见不鲜的难题。在进行平板划线接种时,一旦察觉细菌受到杂菌的侵扰,我建议尽快重新培育新的细菌样本,以免后续实验衍生出更多误差。 关于如何有效防止杂菌污染的再次发生,以下是我提出的几点提议: 1、 定时更新培养基,并验证抗生素的有效性: 长时间使用的培养基可能会导致细菌生长状况欠佳或遭受杂菌污染。因此,我们需要定时更换新的培养基来降低这种风险。同时,验证抗生素是否仍然有效也至关重要,抗0HE染色适用于生物医学、病理学科研与教学。在病理诊断领域,HE染色凭借其卓越的染色效果,成为了广泛采用的常规染色方法。它不仅能够让组织在显微镜下清晰显现,更有助于病理医生做出精确的诊断。今天给大家梳理了HE染色中常见的问题、处理策略以及实验中的关键注意事项。 一、染色不均问题 染色不均往往由切片厚度不一、染色时间不当、脱蜡水化不充分或试剂分布不均等因素引起。解决方法如下: 1、提高切片技术,确保切片厚度均匀,00在基础科学研究中,生物样本的前处理环节举足轻重。它不仅对实验结果的精准度和可信度产生直接影响,还能大幅提升数据分析的效率与品质。通过标准化的前处理步骤,我们能最大限度地降低样本污染和变异的风险,确保所获取数据的有效性。今日,让我们一同探讨学习常见的样本前处理方法! 一、样本采集 Ⅰ 细胞样本 对于贴壁细胞,需利用胰蛋白酶或细胞刮刀处理后转移至离心管;悬浮细胞则直接吸取至EP管。随后,在4℃条件下,以1000×g的0一、细胞 1.细胞接种浓度的选择 • 贴壁细胞:鉴于细胞尺寸的差异,建议依据实际情况适当调整细胞密度分布。 • 悬浮细胞:通常在96孔板中,每孔置入10000个细胞,可通过细胞计数方式进行布板。 采用状态优良的细胞进行铺板,传代过多的细胞不宜使用。铺板过稀,细胞杀伤效果不明显;铺板过密,细胞可能大量死亡。细胞密度多采用10000个/孔,100ul/孔。 2.药物浓度与处理时长的设定 • 不同细胞对药物的敏感性不同。若药物浓度未知,可查阅相0动物的选择大鼠和小鼠。 造模方法 目前常用的肥胖动物模型主要分为四大类:食物诱导型、下丘脑损伤型、内分泌失调型和遗传型。 01食物诱导型肥胖动物模型 采用高脂饲料结合改良的方法12周成功建立饮食诱导型肥胖动物模型,致肥率高达83.3%,造模结束后观察模型组的体质量、Lee’s指数、血清TG值等指标与正常组存在显著性差异,且肾脏病理表现符合肥胖相关性肾病(ORG)早期病理表现,除了作为研究单纯性肥胖的动物模型外,也可作为实验研0一、膜过滤的基本机理 微孔滤膜的工作机制依托于膜过滤原理,即当液体或气体在压差驱动下穿透半透膜时,滤膜会拦截直径超出其孔隙的颗粒或分子,形成滤饼或吸附层,而直径小于滤膜孔隙的颗粒或分子则穿透滤膜,达到分离效果。 膜过滤的过滤机理主要分为三种:机械拦截、吸附拦截和架桥拦截。 机械拦截:这是最直接的过滤方式,颗粒物因大于滤膜孔隙而被拦截。 吸附拦截:这是颗粒物与滤膜表面相互作用而被截留的现象,即便颗粒物尺