兄弟们！换了新课题组，跑胶真的让我心态崩了😭 做实验的小伙伴们快来帮我看看，这DNA条带怎么跑成这样了？？？ 为啥出现这样的条带，Marker倒是挺清晰的 DNA体系成分如下：Buffer，MgCl2，dNTPs，BioTaq，Primer F，Primer R，DNA，ddH2O，BSA 我试过的解决办法： 重新配胶 调整了电压和时间 重新提取DNA，浓度也测了没问题 但结果还是这样……我真的会谢🙃 有没有遇到过类似情况的兄弟？ 是不是我的胶配比有问题？还是上样量不对？ 有没有什么细节是我忽

DUSP6如何抑制NICD蛋白酶体降解？ DUSP6抑制泛素介导的NICD蛋白酶体降解 被切割的Notch1细胞内区域作为转录激活因子，激活参与肿瘤发育的各种基因。切割的Notch1细胞内区域活性可以通过磷酸化来调节，以标记泛素介导的蛋白酶体降解。然而，没有报道任何负调节因子可以使Notch1细胞内区域去磷酸化，从而保持其细胞活性/丰度。DUSP6与NTM水平的相关性提示DUSP6可能调控NTM。 第一步，DUSP6与NTM结合 Co-IP实验显示内源性NTM可与细胞中flag-DUSP6结合；同时，内源

RIP-Seq原理，要点，优劣势 RIP-Seq检测原理： 细胞内蛋白RNA互作组RIP-seq检测，即免疫沉淀RNA结合测序分析检测。RIP-Seq检测原理和IP-Mass类似，不同的是前者利用目的蛋白抗体将相应的RNA-蛋白复合物（RBP）沉淀下来，然后分离纯化捕获RNA，结合高通量测序技术对目标RNA进行测序分析。 RIP-Seq检测要点： RIP-Seq服务要点和IP-Mass类似，但要求更高，精简如下： （1）试验设计：RIP-Seq强烈建议设置实验组别和生物学重复检测。 （2）蛋白表达和细胞量：比IP-Mass

CoIP-Mass检测原理： 细胞内蛋白互作组CoIP-Mass检测，即免疫沉淀结合质谱分析检测，是研究细胞内蛋白互作的常规前置技术。 CoIP-Mass检测要点： （1）试验设计：尽量进行试验组别设计和进行生物学重复检测，提高后续验证的阳性率。常规过表达单组（Ab IP vs IgG IP）；动态互作组学（实验组vs对照组vs Ig组）。根据目的设计适当的生物学重复。如果后续以IP-Mass数据进行互作组标准分析，则需要3-4组生物学重复；如果后续以寻找关键互作蛋白，进行机制深

circCFL1直接与HDAC1互作 一、初步筛选出与circCFL1的互作蛋白分子HDAC1 为了阐明circCFL1对TNBC影响的潜在分子机制，进行RNA pull down实验，对显著富集的55 kD蛋白进行质谱分析（图1a），发现HDAC1是circCFL1的高潜蛋白（图1b）。分子对接显示circCFL1与HDAC1蛋白存在物理结合（图1c）。 二、确定circCFL1与HDAC1存在互作 FISH和IF检测发现circCFL1和HDAC1在细胞核中共定位（图1d）。RNA pull down-WB实验证实circCFL1和HDAC1相互作用（图1e）。 三、确定circCFL1与HDAC1结合的特定区域 首

图1 分子互作机制 一、找SCARB2的互作蛋白 通过IP-MS分析发现MYC、HDAC3是潜在的相互作用蛋白（图2a）。Co-IP实验证实MYC与SCARB2和HDAC3互作（图2b-d）。Co-IP实验发现MYC和SCARB2互作位于细胞质和细胞核（图2e）。此外，Co-IP还发现SCARB2的缺失增加了HDAC3与MYC的互作，而SCARB2的过表达减少了HDAC3与MYC的互作（图2f-g）。 二、确定互作的结构域 针对MYC的结构域构建不同突变体进行Co-IP实验，MYC的CT元件和 NTD结构域负责MYC与SCARB2和HDAC3的相互作用（图2h），表明SCARB2与H

PHLDA2与ALOX12相互作用 一、确定ROS铁死亡系统的相互作用分子 通过SFB标签抗体，进行IP-MS和IP-WB发现PHLDA2与ALOX12互作（图1a、b）。进一步通过内源抗体Co-IP双向验证PHLDA2与ALOX12存在相互作用（图1c-d）。而免疫荧光共定位实验发现PHLDA2和ALOX12能够同时共定位于细胞质（图1e），进一步佐证了PHLDA2-ALOX12复合体的存在。 二、确定PHLDA2和ALOX12互作特异性 PHLDA2属于PH样结构域家族A，包括PHLDA1、PHLDA2和PHLDA3（图1f）。Co-IP实验分析发现，PHLDA1、PHLDA2和PHLDA3中，只有PHL

结直肠癌（CRC）的发病机制是多方面的，涉及控制肠上皮细胞增殖、凋亡和存活的多种细胞信号通路的失调。Notch1在癌症发展中发挥多种作用，目前尚不清楚是否存在能够使裂解的Notch1跨膜/细胞内区（NTM）去磷酸化以调节其功能的磷酸酶。双特异性蛋白磷酸酶（DUSPs，也称为MAPK磷酸酶）DUSP6是否参与和调节功能尚不清楚。 2024年11月，新加坡国立大学团队在Nat Commun.（IF=14.7）上发表了题为“DUSP6 regulates Notch1 signalling in colorectal cancer”的研究成果。发现DU

iFluor 647琥珀酰亚胺酯对标记蛋白质（特别是抗体）进行了优化。这些染料明亮、光稳定，并且对蛋白质的猝灭作用最小，是与蛋白或抗体偶联的常用工具。NHS 酯可用于标记蛋白、胺修饰的寡核苷酸和其他含胺分子的伯胺 (R-NH2)。 图示 图1.用小鼠抗微管蛋白染色HeLa细胞，再用iFluor647山羊抗小鼠IgG (H+L)（红色）染色；细胞核用DAPI染色（蓝色）。 图2.HeLa细胞与小鼠抗微管蛋白孵育，再分别与iFluor647山羊抗小鼠IgG偶联物（红色，左）或AF647山羊抗小鼠IgG（

Keap1是小胶质细胞中USP7去泛素化的直接底物 第一步，筛选USP7底物蛋白 基于氨基酸的稳定同位素标记（SILAC）蛋白质组学，其中5种在EB处理后显著下调（图2a）。其中，Keap1在炎症过程发挥关键作用。因此，推测Keap1可能是USP7激活小胶质细胞的潜在底物蛋白。放线菌酮（CHX）细胞，发现EB依赖的Keap1降解明显加快（图2b）。 第二步，验证USP7与Keap1相互作用 Co-IP实验发现，USP7与Keap1相互作用（图2c）。免疫荧光分析显示EB通过促进USP7核转位来抑制USP7-keap1共

第一步，预测分析ENO1和PD-L1之间的互作 基于AlphaFold2预测分析发现位于与PD-L1相互作用界面的ENO1的四个关键残基（N52、K54、K197和E250）（图2a-b）。 第二步，ENO1的E250介导与PD-L1相互作用 对每个残基构建N52A、K54A、K197A和E250A突变体，Co-IP分析发现E250突变为丙氨酸（E250A）显著降低了ENO1与PD-L1之间的相互作用（图2c）。另外，分析还发现ENO1的E250能够与PD-L1上的R125形成临界盐桥，从而增强相互作用的稳定性（图2a）。表明ENO1的E250在介导PD-L1相互作用中的重要

结直肠癌（CRC）的发病机制是多方面的，涉及控制肠上皮细胞增殖、凋亡和存活的多种细胞信号通路的失调。Notch1在癌症发展中发挥多种作用，目前尚不清楚是否存在能够使裂解的Notch1跨膜/细胞内区（NTM）去磷酸化以调节其功能的磷酸酶。双特异性蛋白磷酸酶（DUSPs，也称为MAPK磷酸酶）DUSP6是否参与和调节功能尚不清楚。 2024年11月，新加坡国立大学团队在Nat Commun.（IF=14.7）上发表了题为“DUSP6 regulates Notch1 signalling in colorectal cancer”的研究成果。发现DU

HIF1A是一种激活基因转录的转录因子。CARM1与HIF1A互作，推测HIF1A/CARM1构成了一个激活复合体，其功能是促进基因转录。 第一步，CARM1与HIF1A形成一个复合体，结合到下游靶标启动子区 为了探究HIF1A与CARM1互作的功能意义，分别在常氧和缺氧条件下，进行anti-CARM1和anti-HIF1A ChIP-qpcr实验，结果显示CARM1和HIF1A共同占据了这些靶标（图1a-b）。 第二步，CARM1与HIF1A形成一个复合体，结合到下游靶标启动子区 为了验证关于CARM1和HIF1A作为蛋白复合物占据目标启动子的

HIF1A是一种激活基因转录的转录因子。CARM1与HIF1A互作，推测HIF1A/CARM1构成了一个激活复合体，其功能是促进基因转录。 第一步，CARM1与HIF1A形成一个复合体，结合到下游靶标启动子区 为了探究HIF1A与CARM1互作的功能意义，分别在常氧和缺氧条件下，进行anti-CARM1和anti-HIF1A ChIP-qpcr实验，结果显示CARM1和HIF1A共同占据了这些靶标（图1a-b）。 第二步，CARM1与HIF1A形成一个复合体，结合到下游靶标启动子区 为了验证关于CARM1和HIF1A作为蛋白复合物占据目标启动子的

第一步，筛选CARM1的互作蛋白 通过anti-Flag-CARM1 IP-MS鉴定与CARM1相互作用的蛋白，分析显示CARM1与HIF1A存在关联（图1a）。 第二步，验证CARM1与HIF1A相互作用 在常氧和缺氧条件下，进行Co-IP分析，CARM1和HIF1A相互作用（图1b-e）。此外，GST pulldown实验也证实CARM1与HIF1A互作（图1f-g）。 第三步，确定CARM1与HIF1A互作具体位置 构建截短载体GST-CARM1-EVH1结构域（1-140 aa）、GST-CARM1-cat（141-480 aa）和GST-CARM1-c（481-608 aa），进行GST pulldown实验，表明CARM1的EVH1结构域负责与HIF1

迄今，临床上仍有大量疾病缺乏安全有效的治疗药物。因此，药物创新研究的重要性日益凸显。中药虽然在临床预防治疗复杂疾病方面具有其特色和优势，但是中药有效成分及其作用靶点、机制不明确等问题仍然是中药现代化的阻碍因素，也是中药发展和走向世界的主要瓶颈之一。 2022年8月，北京大学药学院屠鹏飞/曾克武团队在Science Advances（IF=11.7）上发表题为“Neuroinflammation inhibition by small-molecule targeting USP7 noncatalytic domain for neurodegenerative disease thera

第一步，ENO1促进PD-L1与STUB1的结合 据报道，ENO1通过募集E3连接酶STUB1调节PD-L1的蛋白酶体降解。敲减STUB1，PD-L1表达增加（图1a）。IP-WB实验发现PD-L1泛素化降低，证实STUB1是CRC细胞中PD-L1的E3连接酶（图1a）。此外，ENO1的缺失增加了PD-L1水平，IP-WB显示PD-L1泛素化降低，重新表达WT ENO1逆转了这种效应（图1b-c）。相反，过表达ENO1可抑制PD-L1的表达，敲减STUB1，则抑制作用被消除（图1d）。另外，内源性Co-IP实验发现ENO1的缺失抑制PD-L1与STUB1互作（图1e），而ENO1过

一篇稿子的命运，质量是录用的前提；而外审的客观评价，则是影响稿子录用的关键因素。外审认为孺子可教，那就会录用，外审认为朽木不可雕，那就不会录用，就是这么简单。 所谓的关系稿，和直投稿，道理是相通的。关系稿能加快或一定程度影响外审直接认为孺子可教，这并不完全客观，有主观干预成分。而直投，则需要寻找到认为孺子可教的杂志和外审，劣势在于需要更多时间，而优势也很明显，则是客观公正公开。 去伪寻真，不造神话，

第一步，ENO1存在O-糖基化修饰 越来越多的证据表明，O-糖基化会影响几种关键代谢酶的活性，从而调节细胞代谢。为了确定ENO1是否被O-糖基化修饰，化学酶标记实验发现OGA（O-连接的N-乙酰葡糖胺水解酶（O-GlcNAcase，OGA）是生物体内唯一水解蛋白质O-糖基修饰的糖苷酶。）抑制剂TMG或O-GlcNAc转移酶（OGT）过表达的情况下，O-糖基化信号显著升高（图1a）。随后用质量标记方法分析ENO1的O-糖基化水平，5kDa的PEG分子与叠氮标记的糖蛋白结合，导致WB信号的分子

磁力架是一款针对分子生物学、基因检测行业及细胞分离应用的磁力架，采用磁珠分离技术用于核酸的提取和纯化，可以有效的帮助研究者在提取的过程中快速高效的分离磁珠，让分离过程更直观便捷。 我们的产品均为高质量的优质产品，具有以下优点： 1.磁力稳定，不会随着使用时间导致磁力减弱。 2.磁力均匀性。 3.外表美观，进行了表面处理，非常耐用。 4.产品规格多，支持定制化服务。 5.严格的设计和制造过程。 6.均严选高质量制造材料

THC结合TRIP13抑制TRIP13/USP7/c-FLIP三元复合物相互作用介导c-FLIP泛素化 研究THC处理后TRIP13、c-FLIP和USP7之间的相互作用。Co-IP实验显示c-FLIP、TRIP13和USP7直接结合在一起，THC抑制了它们在TNBC细胞中的结合能力（图3f）。此外，分子对接和分子动力学分析表明，USP7、TRIP13和c-FLIP形成三元配合物，其中TRIP13是连接c-FLIP和USP7的桥梁；THC通过与ASP89和ASP84的氢键与TRIP13相互作用（图1g）。另外，THC的加入削弱了USP7、TRIP13和c-FLIP之间的总结合能和氢键相互作用（图1h-i）

罗丹明123是常用的线粒体染色剂，可以用于染色各种细胞，包括植物细胞和细菌；据数据分析，罗丹明123也可能是MRP1的底物。比MDR的功能检测预后指标更好。 图1.罗丹明123 CAS62669-70-9化学结构 罗丹明123 CAS62669-70-9参数 Ex(nm) 508 Em(nm) 528 分子量 380.82 溶剂 DMSO 存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮 罗丹明123 CAS62669-70-9适用范围 1.用于标记活细胞的线粒体，还用于测量线粒体膜电位 2.选择性地定位于癌细胞，检测癌细胞 3.用于流式细胞术中作为P-糖蛋白报告

第一步，确定调节YBX1表达的潜在机制---泛素-蛋白酶体降解途径 为了进一步确定调节YBX1表达的潜在机制，泛素-蛋白酶体降解途径和自噬-溶酶体途径是细胞内蛋白质降解的两种重要途径。用MG132、3MA和CQ处理原代神经元（3MA是一种广泛使用的抑制细胞自噬的抑制剂，可抑制III类PI3K；CQ通过增加酸性内体/溶酶体的pH值来破坏溶酶体功能；MG132是一种广泛使用的泛素-蛋白酶体降解途径抑制剂。），发现MG132处理后，YBX1的表达水平升高（图2a）。表明泛素-蛋

✨生物科研神器 —— 离心管磁力架 科研党必备！离心管磁力架，快速分离磁性物质，提高实验效率。精准吸附，让你的实验结果更可靠。离心管磁力架，用于生物实验超方便。能有效分离样品，操作简单。助力科研人员，提升实验速度与精度。在生物科研中，离心管磁力架超实用。轻松分离，节省时间。让你的实验流程更顺畅，提高实验质量。值得拥有

（1）AARS1作为一种蛋白质乳酸转移酶，使用乳酸作为直接的乳酸供体 第一步，AARS1与乳酸存在结合 分子对接预测乳酸可以很容易地结合到AARS1的催化口袋上（图1a）。等温滴定量热法验证了该结果（图1b）。 第二步，确定AARS1是一种乳酸转移酶 体外乳酸化实验显示AARS1能够以依赖于乳酸和ATP的方式直接使组蛋白H3和H4乳酸化（图1c），随后的质谱分析也显示AARS1能直接在K18处乳酸化H3肽（图1d）。AARS1催化袋内氨基酸残基突变体（5M）消除了其乳酸转移酶活

鉴于circrna通常作为miRNA海绵发挥作用，研究了circNOLC1是否可以在CRC进展过程中与miRNA结合。Anti-AGO2 IP分析发现circNOLC1显著富集（图1a）。通过生物信息学分析，发现有7个潜在的miRNA可与circNOLC1结合，其中miR-212-5p是唯一一个报道与CRC转移相关的肿瘤抑制因子，其表达水平在CRC细胞系中显著下调。circRIP实验发现circNOLC1和miR‐212‐5p在复合物中特异性富集，与生物素偶联的miRNA pull-down结果一致（图1b-c）。双荧光素酶实验结果也证实二者存在结合（图1d）。进

ChIRP-MS和RNA pulldown-WB实验，发现AZGP1, DSG1和KRT16证明与circNOLC1存在互作（图1a-c）。因AZGP1在CRC中高表达，且在葡萄糖代谢中发挥重要作用，故将其作为研究对象。RIP实验发现circNOLC1在anti-AZGP1下拉物中显著富集（图1d）。为了确定circNOLC1与AZGP1互作区域，设计circNOLC1缺失突变体，进行RNA pulldown实验，表明circNOLC1的nt 91-150是circNOLC1与AZGP1相互作用必需的（图1e）。 进一步检测发现，circNOLC1仅调控AZGP1蛋白水平，用蛋白酶体抑制剂处理细胞显示MG132显著提高AZGP1

ABHD11-AS1与SART3相互作用 已知lncRNA功能机制之一是与RNA结合蛋白(RBPs)相互作用，这些RBP在调节lncRNA的生物学功能中发挥着关键作用。接下来，为了确定ABHD11-AS1促进肺癌发生和进展的潜在机制，进行RNA pulldown-Mass实验（图1a）。5个候选分子的RNA pulldown-WB验证结果显示，SART3在实验组和阴性对照组差异最大（图1b）。SART3敲低显著降低细胞干性（图1c-d），表明ABHD11-AS1与SART3的相互作用可能在肺 癌的发生发展中起重要作用。 全文分享可查阅：【《Environ Int》解

🐭小鼠的舒适之选 —— 刨花垫料🎉 最近在给小鼠们安排垫料的时候，发现刨花垫料真的是太棒啦！忍不住来和大家分享一下它的优势和特点。 ✨优势： 吸水性强💧：能够快速吸收小鼠的尿液，保持饲养环境的干燥，减少异味的产生。 舒适度高😌：柔软的刨花让小鼠可以舒适地活动和休息，就像躺在小床上一样。 天然环保🌳：由天然木材制成，无毒无害，不会对小鼠的健康造成任何影响。 性价比高💰：价格相对较为实惠，而且使用时间较长，

检测发现敲低MYH9同样仅下调SNAIL的蛋白水平（图1a-b）。为了进一步验证MYH9的作用机制，用Biogrid分析候选互作蛋白，发现USP45和SNAIL是MYH9的候选互作蛋白。内源Co‐IP实验分析表明MYH9可分别与USP45、SNAIL和泛素互作，Co-IP实验还发现USP45敲低可改善MYH9对SNAIL的去泛素化和稳定性的影响（图1c-d）。同样MYH9也能改变CHX和MG132处理的SOC细胞中SNAIL的稳定性（图1e）。表明MYH9与USP45、SNAIL和泛素互作，并通过USP45影响SNAIL蛋白的稳定性。 进一步的功能回复实验结果，

泛素E3连接酶ABLIM1致癌作用的详细分子机制为了探索ABLIM1致癌作用的详细分子机制。敲减ABLIM1，进行RNA-seq，KEGG分析发现NF-κB信号显著富集，且通路相关的前10个基因表达被抑制（图1a-b）。细胞核和细胞质蛋白检测发现，ABLIM1敲除抑制了细胞质p65及其核转位（图1c）。GEPIA2数据库中结直肠癌和正常结直肠组织中RELA表达水平与ABLIM1表达水平呈正相关（图1d），支持ABLIM1对p65的调控。 ABLIM1调节IκBα/NF-κB/CCL20的活化（Ref. Fig4） 全文分享可查阅：【《Cell Death D

三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中最恶性、预后最差的亚型。探索TNBC的新型致癌因素和治疗药物仍然是改善预后的重点。四氢姜黄素（THC）是姜黄素（CUR）的主要代谢产物，具有潜在的抗肿瘤活性。但THC在TNBC中的抗肿瘤活性和机制仍不清楚。 2024年11月4日，天津中医药大学康宁/邱峰/张强团队在Journal of Advanced Research（IF=11.4）上发表了题为“Tetrahydrocurcumin targets TRIP13 inhibiting the interaction of TRIP13/USP7/c-FLIP to mediate c-FLIP ubiquitination in triple-negative breast cancer

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在生物化学、分子生物学和医学等领域中，分离和纯化特定的生物分子是一项关键任务。离心管磁力架作为一种便捷而高效的工具，在分离过程中发挥着重要作用。它利用磁力吸附的原理，能够快速、准确地分离含有磁性颗粒的混合物，为实验研究和临床诊断提供了有力的支持。 二、离心管磁力架的工作原理 离心管磁力架通常由一个磁性底座和多个放置离心管的插槽组成。当含有磁性颗粒的溶液置于离心管中，并靠近磁力架时，磁性颗粒会受到磁力

定义和用途 粗饲料 是指在饲料中天然水分含量在 60% 以下，干物质中粗纤维含量等于或高于 18% 的饲料。主要包括干草类、秸秆类（如玉米秸秆、小麦秸秆）、农副产品类（如秕壳、藤蔓）等。它的主要作用是为反刍动物（如牛、羊）提供填充物质，刺激反刍和胃肠蠕动，维持正常的消化功能。同时，粗饲料也能提供一定量的能量和少量的蛋白质等营养成分。例如，羊在采食大量干草的过程中，干草中的纤维素等成分可以帮助羊的瘤胃进行正常的发酵

数据库分析筛选：通过FISH和核-细胞质RNA分离实验发现，circRNA主要分布在细胞核中。利用数据库（circAtlas2.0 database， ENCORI database; SPP database）分析发现，circRNA与LIG1启动子的结合蛋白有显著重叠，其中FOXA1是最显著的蛋白。进一步预测与FOXA1共同作用的蛋白，发现TET1与FOXA1结合。 调控互作复合体验证：在GEM耐药株中，CoIP验证FOXA1和TET1相互作用；进一步沉默FOXA1和TET1后，LIG1表达降低，证实在耐药株中FOXA1/TET1复合体协同调控LIG1表达。进一步通过ChIRP和RIP

在急性髓系白血病（AML）研究中，研究人员采用ChIP-seq技术探讨CCS1477对AML细胞EP300对增强子占位影响。通过比较药物处理和对照组细胞在1、2、6、48h多个时间点的EP300 ChIP信号，研究人员发现随着药物处理时间的变化，EP300占据位点的模式呈现不断演变的方式。EP300占位模式从最初1h内就开始出现，在前2h内仅有不到2%的EP300占位结合位点出现ChIP信号丢失；而到48h则出现丢失和新增（~10%）的混合模式（图1①）。 对EP300 ChIP强占位的位点（Top20%）进行基序富

🐭小老鼠的美味佳肴🥰 | 实验鼠饲料大揭秘 🎈亲爱的科研朋友们，今天我要给大家种个草🌱，一款超棒的实验鼠饲料。😎 🐹实验鼠饲料，真的是小老鼠们的最佳伴侣。🥰它的营养超级丰富，就像是为小老鼠们量身定制的美食盛宴。🌟 💪富含蛋白质、维生素和矿物质，能够满足实验鼠的各种营养需求。🐾让小老鼠们茁壮成长，活力满满。💥 🌾而且，这款饲料的品质非常可靠。经过严格的检测和筛选，确保安全无虞。🙌可以放心地给小老鼠们

一、粗饲料与小鼠基础饲粮 小鼠基础饲粮组成和营养水平参照 nrc 1994，粗蛋白、粗脂肪、粗纤维等是小鼠正常生长发育所必需的营养成分。 二 维持瘤胃正常功能和机体健康 适宜的粗纤维水平可避免淀粉迅速发酵产酸，降低胃内食糜 pH 值，抑制纤维素分解菌活性，影响正常消化机能，甚至导致机体酸中毒。 维持正常反刍 刺激胃壁，促进瘤胃蠕动和动物正常反刍，产生碱性唾液调节瘤胃内食糜酸度，保证瘤胃内微生物正常繁殖和发酵食糜。 （三）良

组学发现：作者通过RNA-seq技术，检测沉默circRNA的PANC-1/GEM耐药株细胞与对照细胞，发现739个差异基因， 包括520个上调基因和219个下调基因。这些差异基因在多种DNA损伤修复通路中富集，包括碱基切除修复、错配修复和核苷酸切除修复。在这些通路中，包含显著下调的共同基因LIG1。LIG1是DNA连接酶家族的成员，在几乎所有DNA损伤修复通路中发挥着重要作用。 应答检测：在GEM抵抗的PDAC组织中，LIG1也高度表达，并且与PDAC组织中的circRNA表达呈正相关。沉默c

小麦胚芽凝集素(WGA)概述 小麦胚芽凝集素（WGA）是一种植物源性的凝集素，主要从小麦胚芽中提取到，是目前研究最多且最有用的凝集素之一． 小麦胚芽凝集素(WGA)适用范围 用于标记哺乳动物细胞、革兰氏阳性细菌、酵母细胞纤维化瘢痕组织的细胞膜，从而进行荧光成像和分析。也可用于免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）和流式细胞术（FC）。 小麦胚芽凝集素(WGA)优点 1.高信噪比 2.荧光强度高 3.不受膜电位控制 4.适用于活细胞和固定细胞 5.对 N-乙

TRIM25是一种泛素连接酶，是否参与调控ITPKB蛋白稳定性积累呢？ 证据1：研究人员发现敲低Trim25，显著增加ITPKB蛋白积累；Trim25过表达则相反抑制其积累（图1a-b）。 证据2：加入蛋白酶体抑制剂MG132后，Trim25过表达诱导的ITPKB水平降低效应被逆转（图1c），表明Trim25通过蛋白酶体途径降低ITPKB的稳定性。 证据3：采用放线菌酮(CHX)追逐实验，发现Trim25敲低增加ITPKB蛋白的半衰期，Trim25过表达则相反（图1d-e）。 证据4：耐药细胞内源Co-IP分析显示Trim25敲低显著

酪胺染料的标记，可能会遇到的问题： 1.非特异性染色：酪胺染料在被HRP催化后，氧化的酪胺具有高度反应性，可能与样本中多个位置的蛋白质发生共价结合，导致背景信号增加。 建议：优化过氧化氢和酪胺的浓度，能减少非特异性染色。降低酶反应时间也有助于减少背景信号。这些都需要客户根据自己的实验进行调整，我们无法给他们一个确定的浓度去尝试。因为不同的实验，环境，操作，都会出现不同的结果。 2.过度放大导致的信号溢出：TSA是

第一步，TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的 蛋白酶体抑制剂MG132以浓度依赖的方式增强TRPML1的蛋白丰度，而BafaA1对TRPML1没有影响，表明TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的（图1a）。 第二步，β-TrCP可能是TRPML1泛素化的主要E3连接酶 Co-IP实验显示，β-TrCP过表达上调TRPML1泛素化水平，β-TrCP ΔF的失活体则不能（图1c）；此外，下调β-TrCP可降低TRPML1泛素化水平（图1d）。另外，Co-IP分析发现，K48R泛素突变体破坏了TRPML1的多泛素化，而K63R突变体则没有。此外

第一步，AARS1分别乳酸化YAP和TEADK90和K108位点 乳酸化蛋白质组学KEGG分析富集多种通路，重点集中在Hippo信号通路上，YAP和TEAD1分别在K90和K108位点发生了乳酸化（图1a-b）。IP-WB检测也显示YAP-TEAD发生乳酸化（图1c）。此外，构建YAP K90R和TEAD1 K108R突变体进行IP-WB检测显示没有发生乳酸化（图1d）。另外，葡萄糖剥夺降低YAP-TEAD1的乳酸化水平，而乳酸处理明显恢复其的乳酸化水平（图1e-f）。 第二步，AARS1与YAP-TEAD1相互作用 Co-IP实验发现AARS1与YAP-TEAD1互作（图1g

一、百萤 pH荧光探针Protonex 红600参数 Ex(nm) 576 Em(nm) 597 分子量 698.94 溶 剂 DMSO 存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮 二、百萤 pH荧光探针Protonex 红600概述 Protonex Red染料显示出pH依赖性荧光。与大多数在较高pH下荧光更强的荧光染料不同，酸性条件可增强Protonex Red染料的荧光。随着pH从中性降低到酸性，Protonex Red染料的荧光急剧增加。细胞外缺乏荧光消除了洗涤步骤。Protonex Red染料为监测酸性细胞区室（如内体和溶酶体）提供了强大的工具。Protonex Red染料

第一步，探讨PRMT1在肝细胞癌中上调的机制 已有结果显示，PRMT1的蛋白水平在HCC中上调，但PRMT1 mRNA水平没有变化。推测泛素-蛋白酶体降解可能参与PRMT1的上调。用两种不同的蛋白酶体抑制剂处理细胞，发现PRMT1蛋白水平呈剂量依赖性增加（图1a），表明PRMT1的蛋白水平可以通过泛素介导的降解来调节。 第二步，确定PRMT1降解的关键泛素连接酶 根据设计的筛选策略，E3泛素连接酶FBXO7为候选互作蛋白（图1b-c）。IP-MS分析显示FBXO7是前10个与PRMT1相互作用的候